抑郁症是一种高患病率、高致残率和高病死率的疾病,目前是全世界致残的主要负担之一。其发病机制主要有单胺神经递质假说、神经可塑性假说、炎症反应等。有研究证实小胶质细胞和星形胶质细胞是控制神经生长及传导的重要成分。然而在应激刺激下,星形胶质细胞和小胶质细胞都转换为促炎状态,通常会激活神经炎症反应,释放大量的促炎细胞因子。这一过程会损害神经传导及突触间的连接,使神经可塑性功能降低。慢性应激模型会导致神经元树突的长度及分支损伤,以及内侧PFC锥体神经元棘突触的数量和功能下降。目前临床上经常使用的治疗抑郁症的药物多具有起效慢、缓解率低、易复发、不良反应较多等缺点。参味宁郁片作为国内首个批准进入临床试验的治疗抑郁症的纯中药小复方制剂,可以调节慢性束缚应激大鼠模型的免疫炎性反应。临床试验证实该药对于治疗气阴两虚型抑郁症有显著疗效。因此,本研究通过对孤养结合慢性束缚应激大鼠抑郁模型的建立,在评价其抗抑郁药效的基础上对该药的抗抑郁机制进行深入研究。本研究主要包括两部分:基于孤养结合慢性束缚应激抑郁模型验证参味宁郁片的抗抑郁药效;基于孤养结合慢性束缚应激抑郁模型探讨参味宁郁片的抗抑郁机制。第一部分:基于孤养-慢性束缚应激抑郁模型验证参味宁郁片的抗抑郁药效目的:建立经典的孤养结合慢性束缚应激抑郁模型,通过体重检测、糖水偏好和旷场实验来整体评价参味宁郁片的抗抑郁药效,为进一步的机制研究奠定基础。方法:在实验开始前先进行旷场实验,选出行为学合格的实验大鼠,分为正常、模型组、盐酸氟西汀组及参味宁郁高、中、低三个剂量组,除正常组外,其余各组均建立孤养结合慢性束缚应激抑郁模型并在造模期间持续给药,在实验的第0天、7天、14天、21天分别进行体重检测、糖水偏好、旷场实验。评价参味宁郁片对该模型引发抑郁行为的药效作用。结果:1、在体重检测方面,造模前各组动物体重并无明显差异,在造模第21天时与正常组相比,模型组动物体重出现显著性差异（P＜0.01）,与模型组相比,盐酸氟西汀组、参味宁郁高、中、低剂量组均具有显著性差异（P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01）。2、在糖水偏好实验中,各组动物在实验开始前的糖水偏好率基本一致,在造模第21天时模型组的糖水偏好率低于正常组,但未体现出显著性差异。其他各组与模型组相比糖水偏好率均有所增加,其中盐酸氟西汀组及参味宁郁低剂量组体现出显著性差异（P＜0.01、P＜0.05）。3、在旷场实验中,各组动物在实验开始前旷场各指标基本一致,在造模第21天时,与正常对照组相比,模型组的总路程、总跨格数、站立次数、中央区域停留时间等指标都呈现出不同程度的降低,并且具有显著性差异（P＜0.01）。盐酸氟西汀组及参味宁郁高剂量组和模型组比较,在总路程、中央区域停留时间及站立次数三个指标均有不同程度的升高,且具有显著性差异（P＜0.01,P＜0.05）。结论:参味宁郁片能够显著改善由孤养结合慢性束缚应激抑郁模型引起的体重减轻、快感缺失及运动量降低等抑郁症状,具有较好的抗抑郁药效。第二部分:基于孤养-慢性束缚应激抑郁模型探讨参味宁郁片的抗抑郁机制目的:以胶质细胞激活-神经元损伤为切入点,研究参味宁郁片对过度激活的胶质细胞及其诱导的神经炎症的抑制作用以及对神经元结构的保护作用,以此探索其治疗抑郁症的作用机制。方法:1、通过对大鼠海马区小胶质细胞标记物Iba-1的免疫组化实验、A1型星形胶质细胞标记物C3/GFAP免疫荧光双标、神经炎性指标NF-κB p65、TNF-α、IL-1β的Western blot实验,共同探索参味宁郁片对胶质细胞过度激活及神经炎症反应的抑制作用。2、通过对大鼠海马区进行组织病理学观察并对神经元细胞核标记物Neun、神经突触结构稳定性指标MAP2、突触密度指标PSD95的免疫荧光单标实验,共同探索参味宁郁片对神经元结构的保护作用。结果:1、在小胶质细胞标记物Iba-1免疫组化实验中,模型组与正常组比较,阳性细胞数目有所增加,与模型组相比,各给药组阳性细胞数均呈降低趋势,其中参味宁郁高剂量组降低较为明显,但并未表现出显著性差异。2、在A1型星形胶质细胞标记物C3/GFAP免疫荧光双标实验中,正常组的C3/GFAP共表达较弱,与正常组相比,模型组的共表达较强（红绿荧光叠加,图像上呈黄色,P＜0.05）。与模型组相比,各给药组阳性荧光共表达均有所降低,其中参味宁郁高、中剂量组具有显著性差异（P＜0.01）。3、在神经炎性指标的免疫印迹（Western blot）实验中,与正常组相比,模型组中的NF-κB p65、TNF-α及IL-1β神经炎症指标明显升高,并具有显著性差异（P＜0.01或P＜0.05）,与模型组相比,盐酸氟西汀及参味宁郁高、中剂量组均明显降低,并具有显著性差异（P＜0.01或P＜0.05）。4、在大鼠海马区组织病理学观察实验中,通过HE染色观察海马区组织病理变化情况。结果显示,正常组神经元层次清晰,结构排列紧密,核仁清晰,细胞簇胞浆呈淡红色,模型组和正常组比较具有显著改变,如神经元细胞核发生了裂解、固缩,并且细胞质与细胞核的边界处不清晰,海马体的组织结构出现了松散,神经及胶质细胞发生了肿胀、排列紊乱等现象。与模型组相比,各给药组在21天给药干预后,上述的病理现象均有明显改善。5、在神经元细胞核Neun、突触结构稳定性指标MAP2及突触密度指标PSD95的免疫荧光单标实验中,结果显示,各组之间的神经元细胞核数目并无明显差异,与正常组相比,模型组的MAP2及PSD95的荧光强度表达较弱,与模型组相比,各给药组两指标的阳性荧光表达均有所增强,其中盐酸氟西汀及参味宁片郁高剂量组具有显著性差异（P＜0.01或P＜0.05）。结论:参味宁郁片在孤养结合慢性束缚应激抑郁模型中具有明显的抗抑郁效果,通过对胶质细胞激活、神经炎症反应的抑制作用,进一步起到保护神经元结构的目的,为中药复方制剂治疗退行性疾病的研究提供了参考。