论文部分内容阅读
IL-21与IL-15都属于共同γ链受体细胞因子,两者在天然免疫和适应性免疫的多个细胞系的发育、增殖、生存和分化过程中都具有重要作用。近来,关于IL-15和IL-21的研究多集中在抗肿瘤免疫中,IL-21还在抗病毒领域备受关注。作为促炎性细胞因子,IL-15和IL-21在移植免疫领域中的研究相对较少,目前关于IL-15和IL-21在移植排斥和移植免疫耐受的研究多与CD8+T细胞的功能相关。本研究结合之前本课题组已发表的体外研究结果进行了拓展,并观察了临床移植患者体内CD8+T细胞的数量和功能变化。第一章IL-21与IL-15对异基因APC刺激下CD8+T细胞增殖影响的体外研究本实验中,使用HLA-A、B与DR完全错配的健康志愿者外周血淋巴细胞建立细胞增殖体系。首先,新鲜分离两个体的外周血单个核细胞（PBMC）,并用免疫磁珠分选出A个体的CD8+T细胞和B个体的CD2-细胞（抗原提呈细胞）,并在分别加入IL-15、IL-21、IL-15和IL-21或者不加任何细胞因子的条件下共培养9天。于9天后分别检测增殖的CD8+T细胞中CD8+CD28-和CD8+CD28+两个细胞亚群增殖情况和细胞因子受体以及胞内毒性分子的表达情况。结果表明,在异基因APC刺激下,单独加入IL-15可以大量扩增A个体的CD8+T细胞,但单独加入IL-21并不能扩增CD8+T细胞[（11.11±1.75）倍vs（1.4±0.23）倍,p＜0.05];在异基因APC刺激下单独加入IL-15后,A个体CD8+T细胞增殖的过程中,CD28分子逐渐丢失,使扩增的CD8+T细胞中CD8+CD28T细胞的比例逐渐增高;共同加入IL-21和IL-15也可以大量扩增A个体的CD8+T细胞,但IL-21可以逆转CD8+T细胞扩增过程中CD28分子的丢失[CD8+CD28-比例:（69.73±6.55）%vs[（13.74±7.25%）%p＜0.05],使 CD8+CD28+T 细胞的比例逐渐升高。另外,IL-15可以促进CD8+CD28+T细胞上颗粒酶B的表达,但CD8+CD28T细胞上颗粒酶B和穿孔素的表达较低,而IL-21的加入可以同时促进CD8+CD28+T细胞和CD8+CD28-T细胞上颗粒酶B和穿孔素的表达。但是,IL-15和IL-21对于CD8+CD28+T细胞和CD8+CD28-T细胞上各细胞因子受体表达的影响作用一致,无论单独还是共同作用均可促进CD132的表达,且都不影响CD215和CD360的表达。研究表明,IL-21不能促进异基因抗原刺激下CD8+T细胞的扩增,但并不影响IL-15对CD8+T细胞的扩增;IL-21可阻止异基因抗原刺激下IL-15扩增CD8+T细胞过程中CD28分子的丢失,但不能促使CD8+CD28T细胞在扩增过程中重新表达CD28分子;与IL-15相比,IL-21可增加增殖细胞中细胞毒性分子的表达。第二章肾移植患者外周血CD8+CD28+细胞和CD8+CD28-T细胞的动态观察鉴于CD8+CD28+T细胞和CD8+CD28-T细胞在体外模拟移植环境下因受IL-21和IL-15的不同影响,可以向不同方向增殖分化的特点,我们进一步观察了临床移植环境下患者体内CD8+CD28+T细胞和CD8+CD28T细胞在异基因移植物刺激下的增殖分化特点,我们收集了 7例接受肾移植手术的患者在术前、术后1周、2周、4周以及8周的外周血标本,通过流式细胞术进行了分析。结果表明,由于术后1周内（术后3-5天）采用抗胸腺淋巴细胞抗体诱导治疗（抗CD3抗体）,肾移植术后患者外周血内的绝大多数CD8+T细胞8均被清除,肾移植患者外周血中CD8+T细胞也在术后出现了明显下降,至第二周时CD8+T细胞在外周血白细胞中的比例从术前[（10.92±5.03）%]降至（3.55±2.86）%,然后逐渐回升,在第8周恢复至术前水平[（9.53±5.07）%]。术后第二周,随着CD8+T细胞的数量到达最低,CD8+CD28T细胞的比例也在术后第2周时达到最低[（5.94±4.29）%],CD8+CD28+T 细胞的相应占比达到最高[（94.1±4.30）%]。随后,随着CD8+T细胞在外周血中的恢复,CD8+CD28T细胞比CD8+CD28+T细胞以更快的速度恢复,表现为CD8+CD28T细胞占比逐渐回升,至第8周时回到术前水平[（36.80±20.90）%]。随着数量的变化,CD8+CD28T细胞中表达颗粒酶B的细胞比例在第1周时降至最低[（27.42±27.50）%],在第8周恢复至术前水平[（84.80±14.90）%]。表达穿孔素的细胞比例无明显变化规律,在第8周时与术前持平[术前:（32.56±21.42）%;第8周:（56.14±16.29）%]。而移植术后CD8+CD28+T细胞中表达穿孔素和颗粒酶B的细胞比例始终维持在术前水平[穿孔素:术前（0.37±0.45）%vs第8周（5.42土6.15）%p＞0.05;颗粒酶B:术前（11.05±10.42）%vs第 8周（13.75±9.95）%p＞0.05]。