胫骨软骨发育不良（TD）是一种损伤骨质和软骨过程的代谢性疾病。由于福美双经常被用于工、农业上,导致肉鸡普遍发生TD。在TD中,肉鸡胫骨软骨不仅会发生骨化,而且还会导致肉鸡跛行、死亡并引起动物福利等问题;此外,TD会降低肉鸡胴体出成率。于是,TD被认为是造成肉鸡经济损失的疾病。在TD发生发展过程中存在不同的生物途径导致软骨细胞发生变化,这些途径通过对一系列相关介质的激活或抑制,促使细胞发出或接受相关信号。软骨细胞中的细胞自然死亡过程由基因决定,能响应特定信号而破坏细胞。然而,如果这种常见的细胞死亡过程失败,可能会导致破坏性的后果。当细胞自然死亡过程失败时,存在一定的调解机制且相互关联,在此过程中,由各种细胞参与,包括进一步调节其它软骨形成的基本蛋白（胶原蛋白和聚集蛋白聚糖）、细胞外金属蛋白酶和NLRP3碱基炎症小体的抗凋亡、促凋亡和凋亡执行着半胱天冬酶。近年来,NLRP3碱基炎症小体成为许多疾病发生中的一个难题。根据多项研究调查,炎症小体与农药和环境毒素引起的各种疾病有关,其参与这种情况开辟了新的治疗方法。因此,本次试验研究TD与细胞凋亡和炎症小体相关细胞死亡方面的分子机制及其生理后果,旨在突出绿原酸（CGA）在特定靶标下的抗凋亡作用。例如,micro RNAs。CGA在控制细胞凋亡感知方面具有潜在作用,它天然存在于各种水果、草药和蔬菜中,并已用于药理试验,具有显著的抗凋亡和抗炎特性。CGA可能为刺激Bcl-2表达并限制细胞凋亡过程中Bax的激活,最终减少成骨细胞凋亡。然而,在福美双诱导的软骨细胞中CGA的实际功能能否对抗micro RNAs表达是不确定的。由于主要的生物学行为,如增殖、分化、代谢和凋亡,都受miRNA的影响。因此,miRNA表达的改变可能会严重影响正常和异常细胞的发育。miR-460a是参与许多结构和细胞代谢过程的必需micro RNA,它与肉鸡中的炎症基因（包括IL-1β）相关。本次研究旨在发现和分析miR-460a的表达谱及其与前面提到的软骨细胞通路的关系。采用流式细胞术、western blot、RT-q PCR、免疫荧光等方法检测标志物的表达。提取软骨细胞并在5%CO2和37°C条件下消化12 h。消化后,将溶液提纯并将软骨细胞以2×10~5个/m L进行接种。同时,当软骨细胞贴壁生长达到培养瓶底部的80%时,再用0.25%的胰蛋白酶-EDTA处理2 min,进行传代培养。细胞外基质中的胶原蛋白（Col-II）和聚集蛋白聚糖等标志物通过免疫荧光确认软骨细胞的形态。使用亚致死剂量的2.5 g/m L福美双培养基诱导细胞产生毒性,然后通过CCK-8确认CGA的最佳剂量（40 g/m L）。此外,预测的miR-460a在Bcl-2的3’-UTR中的结合位点已经得到验证。为了构建psi-野生型Bcl-2 3’UTR和psi-突变体Bcl-23’UTR,将构建了Bcl-2 3’UTR扩增并将野生型Bcl-2 3’UTR和突变体Bcl-2 3’UTR插入到psi-CHECKTM 2载体中。根据研究结果,含有Bcl-2野生型细胞的荧光素酶活性显著降低（p＞0.00）。然而,在miR-460a过表达的细胞中MUT 3’UTR细胞的活性并不完全不同（p＜0.03）。此外,在miR-460a过表达的组中也观察到显著的细胞凋亡率（p＜0.05）,表明miR-460a对软骨细胞凋亡有不良影响。在进一步研究的基础上,Bcl-2抑制或miR-460a的过表达与细胞凋亡、线粒体功能障碍和NLRP3碱基炎症小体激活有关,从而进一步导致IL-1β的产生。这种功能障碍导致凋亡执行者中的caspase、Caspase-3和Caspase-7在Bax和Bak介导的细胞色素C的驱动下被激活。同样,在miR-460a过表达的组中,CD147（细胞外金属蛋白酶诱导剂）和软骨形成基本蛋白（例如胶原蛋白和聚集蛋白聚糖）的表达水平也受到抑制。我们进一步探索了CGA在相同信号通路中的作用。结果表明,CGA在体外和体内试验中均能降低细胞凋亡率、增强软骨细胞的活力,并伴有Bcl-2的激活,从而进一步调节Caspase-3/Caspase-7的表达。相反,随着Caspase-3、Caspase-7的裂解增加和Bcl-2的下降,miR-460a的表达上调表明TD模型的软骨细胞中NLRP3碱基炎症小体的激活。因此,这些蛋白质的平衡保证了软骨细胞在发育过程中对细胞凋亡的适当控制,而导致促炎信号传导的能力较低。于是,CGA对miR-460a具有负调控作用,从而对凋亡和炎症体通路产生负调节功能。此外,这些研究结果指出CD147和Nod样受体pyrin结构域3的参与,这可能是消除TD和所有其它软骨细胞相关疾病的潜在目标。例如,骨质疏松症和骨关节炎的所有病理阶段。