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华南忍冬(Lonicera confusa DC.),又名山银花,为忍冬科忍冬属半常绿藤本植物,是山银花药材的主要植物来源。其干燥花蕾或带初开的花入药,具有清热解毒,凉散风热的作用,是华南地区的重要药材。本文针对山银花药材中酚类有效成分含量不稳定、种质来源混乱等问题,分别从药材质量控制和植物种质资源利用的角度,对华南忍冬进行了研究。主要内容包括:(1)应用植物解剖学、组织化学和细胞化学相结合的方法,研究花器官中酚类成分的积累规律;(2)以华南忍冬在我国主要分布区的5个野生居群为研究材料,采用RAPD分子标记技术,检测其遗传多样性。主要结果如下:
1.显微及超微结构观察发现,华南忍冬花冠筒的内、外表皮细胞从幼蕾期至金花期逐渐分化成熟,形成中央大液泡。表皮下的薄壁细胞在幼蕾期和绿蕾期排列紧密,含大量叶绿体;在白蕾期排列疏松,出现细胞间隙,细胞质被液泡挤压沿细胞壁的边缘分布,叶绿体分布于细胞壁的内侧,淀粉粒丰富;至银花期胞间隙进一步增大,叶绿体极少;到金花期胞间隙达到最大,叶绿体消失。木质部导管分子在发育进程中逐渐分化成熟,完成细胞壁的木质化加厚。
2.花器官中酚类成分的积累规律研究表明,在组织学水平上,幼蕾期和绿蕾期整个花冠筒包括内外表皮细胞、表皮下的薄壁细胞、维管束,都含有丰富的绿原酸;从白蕾期开始绿原酸含量减少,至银花期和金花期,只有外表皮下几层薄壁细胞的液泡和维管束含有少量的绿原酸,但维管束羟基肉桂酸含量增多,同时内外表皮细胞壁、外表皮下几层薄壁细胞的细胞壁分布有阿魏酰奎尼酸衍生物。由幼蕾期至金花期,花萼筒一子房的薄壁细胞、维管束和胚珠都含有绿原酸;维管束的羟基肉桂酸含量和外表皮细胞壁的阿魏酰奎尼酸衍生物含量呈逐渐增加的趋势。黄酮类物质在绿蕾期的整个花器官组织中都有分布。在细胞学水平上,花冠筒发育早期酚类物质主要分布在细胞质中,发育成熟后在液泡或细胞壁中积累。
3.花蕾重量和绿原酸含量测定结果表明发育期对山银花药材重量和绿原酸含量有显著影响。
4.居群遗传多样性的研究结果表明:10条随机引物扩增出100个可分析位点,多态位点百分率(PPL)为87.00%。经POPGENE分析发现,华南忍冬居群平均水平的多态位点百分率为58.86%,Nei’s基因多样性(日)为0.2647,Shannons信息指数(I)为0.4022,具有较高水平的遗传多样性。居群间遗传分化程度较高(Gst=0.3839);地理距离与遗传距离之间具有显著相关性(r=0.8504,P=96.80%),表明地理隔离效应是导致居群间遗传分化的重要因素。根据遗传距离和遗传相似系数的UPGMA聚类分析,罗浮山居群(LFS)和新兴居群(XX)先聚在一起,再与南宁居群(NN)聚成一类,而徐闻居群(XW)和海口居群(HK)聚成另一类。