产纤维素酶兼性厌氧芽孢杆菌的分离筛选及在动物生产上的初步应用

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ynhz009
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本研究是为了筛选出产纤维素酶活性较高、而对氧气需求不高的兼性厌氧芽孢杆菌。试验以新鲜奶牛粪便为样品,利用芽孢杆菌耐高温的特性,经80℃水浴杀死非芽孢菌,从而分离筛选出一批芽孢杆菌。采用刚果红平板染色法,并通过对透明圈的测定和计算,选出13株具有较高纤维素酶活性的菌株。在对这批菌株进行生理生化鉴定的基础上,选出一株产纤维素酶活性较高、兼性厌氧梭状芽孢杆菌。将其制成菌悬液,按0.5ml/只的剂量,腹腔注射平均体重20g的小鼠,测定出对小鼠的半数致死量为2.3×1010/ml,按每克日粮中活菌(或孢子)数为2×105~106个的标准,证实该菌株添加到动物日粮中具有较高的安全性。对筛选出的菌株进行产纤维素酶条件的研究,测定影响细菌产酶的几种主要因素(碳源、氮源、发酵温度、发酵时间、培养基初始PH、接种量)在不同条件下对酶活力的影响,从而筛选出最适产酶条件。首先分别测定单因素条件下每种因素对纤维素酶活的影响,根据单因素条件下的测定结果,设计6因素三水平正交试验(L27(313))对其产酶条件进行了优化,从而筛选出最佳发酵产酶培养条件为:碳源:麸皮1%,氮源:牛肉膏2%,初始pH:8,发酵温度:42℃,发酵时间:36h,接种量3%。将筛选出的菌株制成活菌制剂,选用24只生理指标基本一致的断奶家兔进行饲喂试验,试验分对照组(基础日粮)和实验组(添加活菌制剂),饲喂30天后,计算增重情况和饲料报酬,测定粪便和不同肠段中纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶活性,比较两组间差异性。结果表明,试验组与对照组相比,两组间增重效果和料重比均有明显差异,经统计分析差异极显著(P<0.05)。其中,试验组日增重比对照组提高7.91g/只,而料重比下降了15.2%,说明在家兔日粮中添加由分离菌株制成的活菌制剂后,有明显的促生长作用,而且试验组日粮得到了更有效的消化吸收。酶活力的测定结果表明:粪便及肠道中纤维素酶活力有明显提高,试验组与对照组差异极显著(P<0.01)。蛋白酶活力则无明显变化,试验组与对照组差异不显著(P>0.05)。淀粉酶活力也受到一定影响,肠壁中淀粉酶活力,试验组略高于对照组,方差分析不显著(P>0.05);盲肠内容物中,试验组与对照组淀粉酶活力差异极显著(P<0.01);而空肠内容物中,试验组比对照组淀粉酶活力有明显提高,差异显著(P<0.05),表明在日粮中添加了该活菌制剂,对淀粉酶活力有一定的影响。
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