b型流感嗜血杆菌结合疫苗简称Hib结合疫苗,人体特别是2岁以下幼儿接种该疫苗后可以产生针对b型流感嗜血杆菌的特异性抗体而得到保护。b型流感嗜血杆菌荚膜抗原的组成是多聚核糖基核糖醇磷酸盐(PRP),单纯的PRP免疫原性很差,属于T细胞非依赖性抗原,对于免疫系统还不成熟的2岁以下的婴幼儿来说,必须将Hib荚膜多糖从TI抗原转化为TD抗原,因此,需要使用化学手段将具有载体效应的蛋白质分子与Hib荚膜多糖共价结合起来,使荚膜多糖获得载体效应,最终使该疫苗具有二次免疫后的加强免疫效果。本文包括三个部分。第一部分是前言,这部分介绍了Hib疫苗的背景信息和主要生产工艺,回顾了多糖蛋白结合疫苗制造工艺中常用的化学联接方法。第二部分是研究报告,针对溴化氰、CDAP(1-氰基-4-二甲基氨基-吡啶四氟化硼)、EDAC(碳二亚胺)和ADH(己二酸二酰肼)四种结合常用的化学物质进行了分析方法的摸索和开发,最终建立了能够达到预定要求的四种方法,分别如下：1、研究建立了Hib多糖蛋白结合疫苗中残余溴化氰检测方法。该方法基于高效阴离子交换色谱串联电化学检测器,该方法样品检测速度快,单个样品上样分析只需10分钟。并对该方法进行了全面的方法学验证。验证结果表明该方法专属性好,最小定量限可以达到5μg／L,检出范围在10-1001μg/L时线性良好,是一个比较好的检测Hib多糖蛋白结合疫苗中残余氰化物的方法。2、研究建立了Hib多糖蛋白结合疫苗中残余CDAP检测方法。该方法基于高效阳离子交换色谱串联紫外检测器,使用该方法对单个样品上样只需30分钟就可完成分析。后期对该方法进行了方法学验证,验证结果表明该方法专属性好,最小定量限可以达到16μg/L,检出范围在100-1000μg/L时线性良好,是一个比较好的检测Hib多糖蛋白结合疫苗中残余CDAP的方法。3、研究建立了Hib多糖蛋白结合疫苗中残余EDAC的检测方法,该方法使用的设备是高效液相色谱串联三重四级杆质谱,该方法专属性好,最小定量限可以达到0.2μg/L,检出范围在10-100μg/L时线性良好。使用该方法对单个样品上样只需5-8分钟就可完成分析。后期对该方法进行了方法学验证。验证结果表明该方法操作简便,数据准确可靠,是一个比较好的检测Hib多糖蛋白结合疫苗中残余EDAC的方法。4、研究建立了Hib多糖蛋白结合疫苗中残余ADH的检测方法。该办法采用了化学显色分光光度法,耗时短,操作简便,检测成本低廉。后期对该方法进行了方法学验证。验证结果表明,该方法专属性好,检出范围在2-20μg/mL时线性良好,测定范围可以低至1μg/mL,是一个比较好的检测Hib多糖蛋白结合疫苗中残余ADH的方法。第三部分是研究结论、展望和体会。通过本研究建立的四种检测方法有效、可靠,可以用来对相关物质残余水平进行定量分析,为相关生产工艺的验证提供了方法上的支持,有利于Hib结合疫苗的质量控制,进一步提高了疫苗的质量。在多糖蛋白结合疫苗这一领域,不同的结合方法需要不同的化学物质,因此,为保证疫苗的安全性,在残余物质监控上还有很多的工作可以进行。