面神经撕扯伤后面神经元凋亡和星形胶质细胞以及c-jun表达变化的实验研究

来源 :中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rain918
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目的:1.选择理想的方法,建立面神经撕扯伤动物模型。2.观察该动物模型中面神经运动神经元(FMN)的凋亡情况以及星形胶质细胞、c-jun表达的变化,探讨FMN的生存状态,星形胶质细胞和c-jun发挥的作用。 方法:1.SD大鼠40只分为3组:空白组,对照组,神经损伤组。麻醉:每次试验随机选择SD大鼠5只,麻醉大鼠。2.耳后沟纵行切开皮肤约1cm,锐性分离皮下组织,于腮腺后上缘暴露筋膜覆盖的面神经主干,充分暴露面神经主干,于茎乳孔处撕扯面神经主干致颅内段部分断离脱出。对照组同样暴露面神经主干但不作处理。3.神经损伤组在建立面神经撕扯伤模型后1、4、8、15、30、45、60天分批处死动物,对面神经核石蜡包埋切片,进行HE染色,采用原位凋亡细胞检测法(TUNEL)检测面神经运动神经元的凋亡,免疫组化检测(三步法)星形胶质细胞和c-jun基因的蛋白表达水平。 结果:1.神经损伤组16只大鼠100%在手术后发生同侧不可逆性面瘫。2.可见面神经核从第4天开始TUNEL阳性细胞开始增加,15天达凋亡高峰,与正常对照组相差非常显著(P<0.01);凋亡高峰之后,TUNEL阳性细胞有所减少,但仍高于正常对照组。3.星形胶质细胞的检测结果正常面神经核GFAP阳性细胞稀疏,胞体小,胞核难以辨认。面神经断裂后同侧面神经核GFAP阳性细胞数3d开始增加,15d达最多,胞体肥大,胞浆丰富,突起增多延长,免疫组化染色,细胞着色最明显,与对照组相差非常显著(P<0.01)。30d上述反应逐渐减弱45d后仍可见到,但胞体明显缩小,染色变浅反应强度仍高于对照组。4.c-jun:神经损伤组阳性细胞数较多,并随时间而变化:第1天,神经损伤组阳性细胞数量增加,三组间差异有统计学意义(P<0.01);此后神经损伤组阳性细胞数缓慢增多,至第4、8天达高峰(P<0.01);而后逐渐下降,但仍高于对照组和空白组(P<0.01)。 结论:1.面神经撕扯伤后同侧面神经核星形胶质细胞在第4天开始增加,第15天达最多,与对照组相差非常显著。第30天反应逐渐减弱,第60天后仍反应强度仍高于对照组。提示星形胶质细胞参与了面神经运动神经元的修复。2.面神经撕扯伤会引起面运动神经元凋亡,并随时间延长缓慢增多,至第8、15天达高峰;而后逐渐下降,但仍高于对照组和空白组。3.神经损伤组第一天即出现c-jun阳性细胞数量显著增加;此后神经损伤组c-jun阳性细胞数缓慢增多,至第4、8天达高峰;而后逐渐下降,但仍高于对照组和空白组。提示c-jun在面神经元损伤后反应中起着重要作用。
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