准确估算电离辐射作用于机体的剂量是核辐射损伤诊断和防治的关键，现有的生物剂量估算方法都存在一些不足如特异性差、本底高、维持时间短及检测方法复杂费时等。随着辐射诱导细胞生长阻滞的分子调控机制的研究成为放射生物学研究的热点课题，辐射后基因在转录水平的变化也就成为研究的焦点。 GADD45基因(生长阻滞和DNA损伤基因45，Growth arrest and DNA damage gene 45)是目前研究比较多的基因，该基因位于p53下游，与辐射诱导细胞周期阻滞关系密切。近年来国外相继有电离辐射诱导GADD45基因表达变化的文献报道，2002年2月，美军放射生物研究所生物剂量小组首次发表了将GADD45基因表达变化用作辐射生物剂量计研究的文献。 为了研究GADD45基因在转录水平表达变化和受照剂量之间的关系，本实验选取健康人外周血单个核细胞为实验对象，应用逆转录半定量PCR的实验方法，测定该基因mRNA的相对量。首先根据文献选择特异性引物，在genbank上进行核实，扩增GADD45基因片段。选择在人体内稳定表达的β-actin为内参，合成引物序列并与GADD45进行同管扩增，产物电泳后在凝胶成像仪上用PCR分析软件分析条带的灰度及密度等因素，两者比值(GADD45/β-actin)表示GADD45基因的相对量。 将100ml健康献血员外周血平均置于6个40ml培养瓶中，分别给予0、1、2、3、4、5Gy X射线照射，提取单个核细胞，加入含10％胎牛血清的1640液后置于37℃培养箱中培养，在培养0h、4h、8h、16h、20h和24h的6个时间点测定GADD45基因的含量。 实验采用6×6析因设计，每交叉点重复测量4次，实验结果(基因mRNA相对量)用平均数±标准差表示，用SARS软件分析数据，比较照射后不同时间点之间、不同照射剂量之间、以及不同照射剂量的各个时间点之间是否有统计学差异；作照射后各时间点GADD45表达量与照射剂量的直线相关分析；作不同照射剂量下GADD45表达量与照射后时间的非线性曲线拟合。军事医学科学院硕_l:论文摘要 实验结果显示，照射后各个时间点上GADD45基因表达量间有统计学差异(P<0.05)。观察照射剂量与基因表达量的关系可看出，在所观察的各时间点上，基因表达量随照射剂量增加而增加，存在直线关系，得出直线回归方程。 观察每个剂量组的基因表达量和时程之间的关系，得出1一SGy的5个剂量趋势一致:照射后基因表达增加，在照后4小时GADD45基因相对量达最高峰，此后下降，在观察到的最长时间点上(24h)该基因量仍未降至初始水平。 本次实验结果表明，X线照射可诱导GADD45基因表达照射随剂量增加而增加，具有较好的线性关系。这与国内外关于X线照射诱导Gl期阻滞及相应基因表达变化的实验结果一致，也再次证明了作为P53下游基因的GADD45基因在辐射诱导的细胞Gl期阻滞中所起的重要作用。因此我们得出初步结论:GADD45基因可以作为一个新的电离辐射生物标志，本实验中建立的Rl’- PCR检测技术快速、简便，有希望成为一个新的生物剂量测定方法。