【目的】:mi R-155既能够影响骨改建,也是一个有力的自噬调节剂,而OC的分化也与自噬密切相关。目前mi R-155对OC分化的调控机制尚不明确。本研究的目的是验证mi R-155是否通过介导自噬对OC分化及活化进行调控,明确mi R-155调节自噬的相关靶基因及其在OC分化中的作用机制。【方法】:分别以小鼠骨髓单核细胞(BMMs)和RAW264.7细胞系作为OC前体细胞,采用体外诱导法获取OC,在诱导培养的不同时间点进行Trap染色,观察OC的生成情况。采用q PCR法检测RAW264.7细胞向OC分化过程中mi R-155的表达,Western Blot法检测OC分化过程中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、p62的表达。在RAW264.7细胞诱导不同时间点(0d,1d,2d,3d)分别以mi R-155 mimics和con mimics进行转染,RANKL继续诱导至第5d进行TRAP染色。在RAW264.7细胞诱导第3d转染mi R-155 mimics和con mimic,并用3-MA自噬抑制剂处理转染的细胞,RANKL继续诱导至第5d,Western Blot法检测自噬相关蛋白的表达。分别采用常见的靶基因预测软件Target Scan、Pic Tar和mi RDB对mi R-155的靶基因进行预测分析,在3个软件的交集中选取研究靶基因。通过si RNA干扰技术沉默靶基因表达后,q PCR检测OC分化及活性相关基因,Western Blot及免疫荧光检测自噬水平。【结果】:RAW264.7细胞比BMMs更易于分化为成熟OC,而且所形成的OC数目更多,体积更大,是一种比较理想的OC前体细胞。RAW264.7细胞生成的OC在诱导第3d出现明显的细胞融合,在第5d破骨细胞数目达到高峰。mi R-155在OC分化过程中并没有显著变化,提示正常状态下mi R-155并不主动参与OC分化。在OC形成前期自噬处于较低水平,在诱导第3-6d自噬逐渐增强。mi R-155过表达在诱导的0-2d抑制OC生成,在诱导第3d mi R-155过表达能够明显促进OC生成。mi R-155的过表达与对照相比,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1上调而LC3-Ⅰ、p62下调,提示mi R-155过表达明显增强自噬;Western Blot结果显示3-MA降低了LC3-Ⅱ、p62及Beclin-1的表达,与对照转染相比,mi R-155的瞬时转染减弱了3-MA对OC自噬的抑制。在三个数据库的预测结果交集中选取自噬相关调控因子Rheb作为研究对象。mi R-155的瞬时转染在m RNA和蛋白质水平降低了Rheb的表达;Rheb基因的敲低能够促进OC生成,并且增强OC自噬。【结论】:本研究发现mi R-155能够通过靶向Rheb增强OC的自噬,从而促进OC的分化和活性。