烹调油烟PM2.5对胎鼠AECⅡ细胞线粒体凋亡途径的影响

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目的探讨烹调油烟中的细颗粒物(PM2.5)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)细胞增殖及线粒体途径凋亡途径相关蛋白表达的影响,为进一步认识烹调油烟PM2.5对肺脏的毒理机制提供理论和实验依据。方法采集烹调油烟PM2.5作为染毒物质,提取孕18天ICR小鼠肺组织中的AECⅡ作为实验靶细胞。MTT法测定不同浓度烹调油烟PM2.5对AECⅡ存活率的影响;流式细胞仪检测烹调油烟PM2.5对AECⅡ细胞周期分布的影响,并评价细胞增殖情况;Western Blot测定烹调油烟PM2.5对AECⅡ中线粒体凋亡途径相关蛋白Bax/Bcl-2,细胞色素C(Cyt-c),Caspase-9,Caspase-3的表达。结果1.12.5ug/ml PM2.5染毒液对AECⅡ作用12h和24h,其细胞存活率与DMSO对照组比较无统计学差异;AECⅡ在12.5ug/ml PM2.5染毒液中培养36h以及在25ug/ml,50ug/ml,75ug/ml和100ug/ml PM2.5染毒液中培养12h,24h和36h后,各PM2.5染毒组的细胞存活率与DMSO对照组比较有统计学差异(P<0.05),且存在时间-反应关系和剂量-反应关系。2.不同浓度的PM2.5染毒液作用于AECⅡ,细胞分布于G0-G1期的比例随PM2.5染毒剂量的升高而升高,与DMSO对照组比较有统计学差异(P<0.05),且存在剂量-反应关系;分布于S期的AECⅡ细胞比例随PM2.5染毒剂量的增加而下降,与DMSO对照组比较有统计学差异(P<0.05),且存在剂量-反应关系;分布于G2-M期的AECⅡ细胞比例受PM2.5的影响,与DMSO对照组比较有统计学差异(P<0.05),但不存在剂量-反应关系;三个时间段各组细胞增殖指数(PI)随PM2.5染毒剂量的升高而下降,与DMSO对照组比较有统计学差异(P<0.05),且存在剂量-反应关系。3.不同浓度的PM2.5染毒36h使AECⅡ细胞内Bax蛋白的表达均高于DMSO对照组,存在剂量-反应关系,各组间有统计学差异(P<0.05);除12.5ug/ml PM2.5染毒组AECⅡ细胞内Bcl-2蛋白的表达高于DMSO对照组(P<0.05)其余各PM2.5组与DMSO对照组无统计学差异;各PM2.5组与DMSO对照组比较,Bax/Bcl-2比值随PM2.5染毒溶度升高而升高,各组间有统计学差异(P<0.05);AECⅡ细胞内Cyt-c的表达在12.5ug/ml PM2.5时低于DMSO对照组(P<0.05),细胞内Cyt-c,Caspase-9和Caspase-3三种蛋白在50ug/ml PM2.5和75ug/ml PM2.5染毒组均高于DMSO对照组,各组间有统计学差异(P<0.05)。结论烹调油烟PM2.5能够通过致AECⅡ细胞增殖下降、诱导AECⅡ通过线粒体途径发生细胞凋亡而引起细胞存活率下降。
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