糖尿病是世界性疾病,其病因、发病机制复杂,至今还没有完全阐明,但总的来说是由胰岛素抵抗和胰岛β细胞分泌缺陷这两个因素引起的。现有的研究发现FFA与这两个因素的发生直接相关。本研究以铜绿假单胞菌PAO1的长链脂酰辅酶A合成酶FadD1为对象,主要进行了以下研究:1)以PAO1的基因组为模板,利用PCR扩增得到fadD1基因。序列分析发现fadD1的开放阅读框(open reading frame,ORF)长1689bp,编码562个氨基酸残基,预测分子量为61.7kDa。结构域分析表明,fadD1包含1个AMP结合功能域。将fadD1基因克隆到克隆载体上,并构建重组表达载体,实现了重组蛋白在大肠杆菌中的表达。2)利用Ni2+亲和层析树脂纯化FadD1,并做酶活检测。将纯化后的FadD1固定到孔径可控的玻璃球上,构建了酶热传感器,并对传感器进行初步检测。本研究表达的铜绿假单胞菌长链脂酰辅酶A合成酶FadD1可以体外检测FFA,并将FadD1固定在酶热传感器上,通过检测酶促反应产生的热来分析游离脂肪酸的含量,将使FFA的检测变得更为快速灵敏、稳定可靠,有希望为糖尿病的前期诊断提供一种全新的方法。课题组前期的研究发现病毒增效蛋白ENHANCIN可以通过降解围食膜蛋白对生物杀虫剂起到明显的增效作用,具有较大的应用价值,本论文的另一部分研究工作是针对粉纹夜蛾颗粒体病毒ENHANCIN展开了蛋白纯化相关研究,主要包括:双HIS标签ENHANCIN的重组表达载体的构建、蛋白的诱导表达、蛋白的亲和层析纯化、纯化蛋白对棉铃虫围食膜蛋白的体外酶解,研究结表达的粉纹夜蛾颗粒体病毒ENHANCIN可有效降解棉铃虫围食膜蛋白,为农林业害虫的生物防治方法提供了理论依据和实践基础。