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第一部分:骨关节炎关节软骨相关分子的基因表达与临床相关性研究目的:通过分析骨性关节炎与股骨颈骨折患者的关节软骨IL-1β,NFAT1,NFAT1B,TNFα,COL2A1,COL10A1,Aggrecan等分子的基因表达,寻找与OA病理过程相关的分子,从而为OA的治疗提供新的途径。方法:收集因骨性关节炎和股骨颈骨折而行全髋全膝关节置换或半髋置换的患者46例,取深部软骨组织1.2g,保存于RNALATER(Ambion)中,直到mRNA抽提(保存时间小于一周)。按Rneasy Fibrous Tissue Midi Kit(Qiagen,guangDong,China)试剂盒所述步骤抽提关节软骨中总RNA,经逆转录试剂盒(Takara)逆转录为cDNA(10ul体系),-20℃保存cDNA直到行PCR反应。实时定量PCR仪测定骨性关节炎与股骨颈骨折患者关节软骨中IL-1β,NFAT1,NFAT1B,TNFα,COL2A1,COL10A1及Aggrecan等分子的基因相对表达量,用2-△△分析结果。统计学分析股骨颈骨折和骨性关节炎患者、髋关节骨性关节炎和膝关节骨性关节炎、膝关节骨性关节炎不同阶段的相关分子基因表达差别与临床的相关性。结果:骨性关节炎患者IL-1β,NFAT1,NFAT1B,TNFα,COL2A1,COL10A1表达高于股骨颈骨折患者(P<0.05)。而Aggrecan表达骨性关节炎患者与股骨颈骨折患者无显著性差异(P>0.05)。髋关节骨性关节炎与膝关节骨性关节炎IL-1β,NFAT1,NFAT1B,TNFα,COL2A1,COL10A1和Aggrecan表达无显著性差异(P>0.05)。膝关节骨性关节炎在不同阶段基因表达差别无统计学意义(P>0.05)。结论:骨性关节炎患者关节软骨中IL-1β,NFAT1,NFAT1B,TNFα,COL2A1,COL10A1等分子的基因表达水平较股骨颈骨折升高,提示这些分子在OA的病理过程中参与了重要作用。第二部分:骨关节炎关节软骨Col2A1和TNFα蛋白表达与临床相关性研究目的:比较骨性关节炎与股骨颈骨折患者的关节软骨分子的蛋白表达差异,初步研究骨性关节炎关节软骨退变相关因素,为OA治疗提供理论基础。方法:收集因髋关节骨性关节炎和股骨颈骨折而行全髋或半髋置换的患者18例,取深部软骨组织,蛋白抽提液抽提总蛋白,保存于-80℃备用。采用特异性抗TNF-α,COL2A1一抗及二抗抗体,应用western-blot技术检测股骨颈骨折与OA患者中TNF-α,COL2A1分子的蛋白相对表达量。结果:骨性关节炎关节软骨中TNF-α,COL2A1分子的蛋白相对表达均高于股骨颈骨折患者,差异有显著性(P<0.05)。结论:TNF-α和COL2A1分子的蛋白表达在骨性关节炎患者关节软骨中表达较股骨颈骨折升高,提示TNF-α和COL2A1分子在骨性关节炎关节软骨退变中起重要作用。