应用GoldCLIP-Seq技术鉴定秀丽线虫生殖系统中与RNA解旋酶结合的RNA分子

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蛋白质-RNA相互作用广泛存在于细胞内,获取个体水平生理条件下的组织细胞特异性蛋白质-RNA相互作用信息对研究细胞功能和分子机制非常重要,也是研究蛋白质-RNA互作的难点之一。我们改造了在哺乳动物细胞中发展出的GoldCLIP(Gel-omitted Ligation-dependent CLIP)技术,使得GoldCLIP技术可以在线虫这种模式生物研究体系中得以应用,为在动物个体水平研究组织细胞特异性的蛋白质-RNA相互作用提供了新工具。GoldCLIP的技术优势在于其通过应用HaloTag可以同Halo配体形成高强度共价键的特性,使得HaloTag融合蛋白质共价结合于含有Halo配体的基质上,配合高强度的漂洗过程,可最大程度的去除非特异性结合RNA,并可减少RNA的损失,有利于后期RNA测序文库的构建;同时该技术省略了传统CLIP技术中所需胶纯化的步骤,避免了同位素的使用,提高了实验操作的安全性。在本研究中,我们在线虫研究平台中发展了GoldCLIP-seq技术体系,并以本课题组在前期工作中发现的两个调控piRNA(PIWI-interacting RNA)基因沉默功能的RNA解旋酶GLH-1和HIP-1为研究对象,验证了该方法在线虫研究平台的有效性。通过生物信息学分析,我们鉴定出多种同GLH-1、HIP-1以及GLH-1 DEAD结构域突变体相结合的生殖系统特异mRNA。这些结果为进一步解析GLH-1和HIP-1如何参与piRNA通路的调控奠定了基础。
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