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目的:制备超顺磁性壳聚糖质粒明胶微球(SPCPGM),在体外研究不同磁场强度、不同频率的脉冲振荡磁场作用下,与质粒(pDsVEGF165Red1-N1)基因释放的量效关系。初步在体内进行活性实验研究,为超顺磁性明胶载药微球的体内研究及临床应用提供实验依据。方法:(1)用化学共沉淀法制备超顺磁性四氧化三铁壳聚糖纳米粒(SPFCN),用透射电镜、X-射线衍射仪、Zeta电位分析仪和振动样品磁场计等对制备的SPFCN进行形态观察和结构表征。(2)制备大量能够在真核细胞中表达人VEGF165的质粒(pDsVEGF165Red1-N1)。对质粒进行DNA序列测定,用SmartSpecTM3000核酸蛋白测定仪测定其浓度。(3)制备超顺磁性四氧化三铁壳聚糖纳米粒质粒(pDsVEGF165Red1-N1)复合物。(4)用交联固化法制备超顺磁性四氧化三铁壳聚糖质粒明胶微球(SPCPGM)和超顺磁性壳聚糖明胶微球(SPCGM)。用纳米羟基磷灰石/聚酰胺骨水泥(由四川大学纳米生物材料研究中心提供)制备中空带侧孔的仿兔桡骨中段骨缺损修复支架。将一定量的两种微球分为(A组)SPCPGM+振荡磁场,(B组)非磁性的SPCPGM+振荡磁场,(C组)SPCGM+中空支架+振荡磁场,其中A组和B组的微球包于双层纱布中,C组的微球装于支架中;在37℃下,用溶出度测定仪的转蓝法测质粒的释放度,采用模拟人工体液(pH 7.4)介质进行体外药物释放试验,用核酸蛋白测定仪测定质粒的释放量。(5)选用新西兰大白兔48只,建立兔桡骨双侧骨缺损模型,随机分为(A组)SPCPGM+中空支架+振荡磁场,(B组)SPCPGM+中空支架,(C组)SPCGM+中空支架+振荡磁场;术后2周、4周、6周、8周、12周,搜集标本,通过大体观察,生血管情况进行定性及定量测定,以评估三种不同处理组促进新生血管的情况。结果:(1)透射电镜下Fe3O4纳米粒外形呈圆形或椭圆形,均匀度好,粒径小于30nm;氮含量为0.0058mg/L。SPFCN表面带正电荷(69.8±5.1mV)。振动样品磁场计结果显示:SPFCN具有超顺磁性。(2)质粒(pDsVEGF165Red1-N1)经扩增、纯化后,用琼脂糖凝胶电泳分析鉴定显示:VEGF165片段大小与预期的相符,基因序列测定结果表明,基因序列正确。用SmartSpecTM3000核酸蛋白测定仪检测质粒浓度为0.28±0.05 mg/ml。(3)复合后的SPCPN Zeta电位为26.7±4mY,仍带正电荷。(4)振荡磁场下SPCPGM体外质粒释放实验显示:SPCPGM具有药物缓释功能,释药时间超过三周。振荡磁场能够促进SPCPGM质粒释放的速率,25天时使药物释放量提高到3倍。结论:振动磁场下SPCPGM促进人工骨血管化的体内实验研究表明:①SPCPGM具有促进体内局部成血管及成骨作用,而SPCGM几乎没有这个作用。②振动磁场的应用,能够明显提高SPCPGM体内局部成血管及成骨的作用,4周时成血管量达到最高峰,6周有大量的骨长成。③促进血管生成及成骨的效能依次为:SPCPGM+中空支架+振荡磁场>SPCPGM+中空支架>SPCGM+中空支架+振荡磁场。