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第一部分冠心病患者血清SDF-1α水平与冠脉狭窄程度及预后的关系目的:本研究拟通过比较冠心病患者和健康个体血清SDF-1α的水平,以及通过冠脉Gensini积分评估SDF-1α与冠脉狭窄程度的关系,通过Logistic多因素分析血清SDF-1水平与主要心血管不良事件的关系,探讨血清SDF-1α在冠心病预后中的价值。方法:选择2019年03月至2020年05月在山西医科大学第一医院心内科收治的冠心病患者101例。根据Gensini积分将患者分为轻度病变组(≤20分,41例)、中度病变组(21~40分,34例)和重度病变组(>40分,26例),根据随访期间是否发生主要心血管不良事件(MACE)将患者分为MACE组(15例)和无MACE组(86例),另选择68例同期于我院进行健康体检志愿者为对照组。检测血清SDF-1α水平,分析其与CHD患者随访期间发生MACE的关系。结果:ELISA检测结果显示:冠心病组血清中SDF-1α水平(859.64±64.61ng/L)高于对照组(253.50±52.30ng/L),差异有统计学意义(t=11.883,P<0.001)。重度病变组血清SDF-1α水平高于中度病变组和轻度病变组(P<0.05),中度病变组SDF-1α水平高于轻度病变组(P<0.05)。单因素分析结果显示,冠心病类型、左心室射血分数(LVEF)、高脂血症、冠脉病变支数、冠脉病变长度、Gensini积分、中性粒细胞数、NLR、SDF-1α水平与CHD患者随访期间发生MACE有关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,LVEF、SDF-1α、中性粒细胞是CHD患者发生MACE的独立影响因素(P<0.05)。结论:冠心病患者血清SDF-1α水平增高,且与冠状动脉病变加重和MACE发生有关,检测血清SDF-1α有助于评估冠心病患者的病情和预后。第二部分过表达SDF-1α的BMSC减轻小鼠心肌缺血再灌注损伤目的:建立小鼠心肌缺血再灌注模型,分别静脉给予BMSC、BMSC-oe SDF-1α以及BMSC-oe SDF-1α+AMD3100(CXCR4拮抗剂),研究BMSC-oe SDF-1α通过SDF-1α/CXCR4信号途径对小鼠心肌缺血再灌注损伤发挥保护作用。方法:采取结扎冠状动脉前降支的方法建立小鼠心肌缺血再灌注模型。术前1h尾静脉注射2×10~6个EGFP标记的BMSC或BMSC-oe SDF-1α细胞,对于AMD3100处理组小鼠,关闭胸腔前,腹腔给予2.5 mg/kg的AMD3100,8h后将实验小鼠处死。(1)取部分心肌组织进行HE染色和TUNEL染色,用于形态学观察和凋亡检测;(2)取部分心肌组织进行间接免疫荧光检测,用于示踪BMSC和PMN。(3)取部分心肌组织提取蛋白用于氧化应激指标的检测;(4)取血标本通过ELISA用于检测TNF-α、L-1β、IL-6和IL-10含量。结果:(1)通过H&E染色和TUNEL染色发现:I/R组小鼠心肌纤维排列紊乱、断裂,心肌结构模糊,有充血现象,炎性细胞浸润程度明显,且心肌细胞的凋亡率明显升高。BMSC能够改善心肌细胞存活,并减少心肌细胞的的凋亡;BMSC-oe SDF-1α能够进一步改善心肌细胞并明显降低了心肌细胞的的凋亡率。(2)过表达SDF-1α能够促进BMSC进入心肌损伤部位,抑制心肌组织中PMN浸润的数量。(3)BMSC-oe SDF-1α能够显著降低心肌组织的ROS、MPO和MDA水平,升高心肌组织的SOD水平;(4)BMSC-oe SDF-1α能够显著降低小鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量,增加IL-10的含量。结论:本研究首次证实了静脉注射过表达SDF-1α的BMSC可保护小鼠的心脏功能并显著减轻心肌缺血再灌注损伤,减少损伤部位的氧化应激和全身炎症因子水平,对I/R心肌具有潜在的保护作用。第三部分过表达SDF-1α的BMSC减轻PMN对缺氧/复氧心肌细胞造成的损伤目的:通过研究过表达SDF-1α的骨髓间充质干细胞(BMSC-oe SDF-1α)减轻心肌细胞缺氧/复氧模型中PMN造成的损伤,改善BMSC在治疗缺血性心脏病只有部分被募集到心肌损伤部位的局限性,为临床治疗再灌注损伤的干细胞疗法提供新思路和新方案。方法:(1)分离培养小鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞,建立缺氧复氧模型。收集这两种细胞培养上清液,通过ELISA检测SDF-1α的含量;通过PCR技术和Western blot技术分别检测这2种细胞的SDF-1α,CXCR4这两个指标m RNA以及相应蛋白的表达水平。(2)分离培养小鼠BMSC并用EGFP标记,通过慢病毒转染,筛选出过表达SDF-1α的BMSC细胞(BMSC-oe SDF-1α)。(3)将BMSC或BMSC-oe SDF-1α与H/R心肌细胞共培养,通过Transwell实验观察BMSC或BMSC-oe SDF-1α的迁移能力,通过流式细胞术检测心肌细胞的凋亡比例和ROS水平。(4)将中性粒细胞(PMN)与H/R心肌细胞共培养,通过流式细胞术检测PMN的趋化,心肌细胞的凋亡比例及ROS水平;通过生化法检测心肌细胞的MPO活性、MDA的含量和SOD活性。(5)将BMSC或BMSC-oe SDF-1α干预的H/R心肌细胞与PMN共培养,通过流式细胞术检测PMN的趋化,心肌细胞的凋亡比例及ROS水平,通过生化检测心肌细胞的MPO活性、MDA的含量和SOD活性。结果:(1)在H/R条件下心肌细胞分泌SDF-1α的能力显著增加,而心肌成纤维细胞分泌SDF-1α的能力无明显改变。H/R能够促进心肌细胞的SDF-1α、CXCR4 m RNA和蛋白表达,而不影响心肌成纤维细胞的SDF-1α、CXCR4 m RNA和蛋白表达。(2)成功构建过表达SDF-1α的BMSC细胞(BMSC-oe SDF-1α)。(3)BMSC-oe SDF-1α相比BMSC向H/R的心肌细胞迁移能力更强,对心肌细胞凋亡和氧化应激更具有修复能力,更适合作为干细胞治疗的工具细胞。(4)SDF-1α/CXCR4信号途径介导的PMN趋化、浸润,促进了心肌细胞凋亡和氧化应激水平增加。(5)BMSC-oe SDF-1α不增加中性粒细胞向H/R心肌细胞趋化,能够显著降低心肌细胞中ROS水平,细胞凋亡水平,降低MPO活性,上调SOD活性,并减少MDA的含量。结论:H/R心肌细胞通过SDF-1/CXCR4信号途径,一方面趋化PMN参与损伤部位的炎症反应,另一方面募集BMSC或BMSC-oe SDF-1α能够减轻PMN引起的心肌细胞损伤。其中,BMSC-oe SDF-1α不仅改善了BMSC移植成功率低的局限性,还能够在不增加PMN趋化的同时减轻I/R对心肌细胞的损伤,更适合作为干细胞治疗的工具细胞。