【摘 要】
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目的:以过氧化氢（Hydrogen peroxide,H2O2）诱导的BRL-3A大鼠肝细胞氧化损伤模型为基础,探讨山楂酸（Maslinic acid,MA）对H2O2诱导的BRL-3A细胞氧化损伤的保护作用,并对其机制进行初步研究。方法:1.山楂酸剂量筛选:取对数生长期的BRL-3A细胞接种于96孔板,培养12 h后,采用不同浓度的山楂酸单独处理细胞8 h,MTT法检测细胞活力;将试验分为对照组
【基金项目】
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国家自然科学基金青年科学基金项目（31301452）； 山西农业大学引进人才科研启动基金（XB2012013）； 山西农业大学科技创新基金项目（201313）；
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目的:以过氧化氢（Hydrogen peroxide,H2O2）诱导的BRL-3A大鼠肝细胞氧化损伤模型为基础,探讨山楂酸（Maslinic acid,MA）对H2O2诱导的BRL-3A细胞氧化损伤的保护作用,并对其机制进行初步研究。方法:1.山楂酸剂量筛选:取对数生长期的BRL-3A细胞接种于96孔板,培养12 h后,采用不同浓度的山楂酸单独处理细胞8 h,MTT法检测细胞活力;将试验分为对照组、H2O2组（模型组）及H2O2+山楂酸组,MTT法检测细胞活力。2.山楂酸对H2O2诱导的BRL-3A细胞氧化损伤的保护作用:将试验分为对照组、模型组及H2O2+山楂酸组,微量酶标法检测细胞LDH、SOD、CAT活力及GSH、MDA含量,DCFH-DA荧光探针法检测细胞ROS水平。3.Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白水平的检测:将试验分为对照组及山楂酸不同浓度单独处理组,Western Blot技术检测细胞Nrf2、HO-1蛋白的表达;将试验分为对照组及山楂酸不同时间单独处理组,Western Blot技术检测细胞Nrf2、HO-1蛋白的表达;将试验分为对照组、模型组、H2O2+山楂酸组及山楂酸单独处理组,RT-PCR技术和Western Blot技术检测细胞Nrf2、HO-1在mRNA和蛋白水平的表达。4.山楂酸相关抗氧化机制研究:将试验分为对照组、模型组、H2O2+山楂酸组及山楂酸单独处理组,Western Blot技术检测细胞p38、ERK及JNK蛋白的磷酸化水平;将试验分为对照组、模型组、H2O2+山楂酸组、H2O2+山楂酸+SB203580组及H2O2+山楂酸+SP600125组,MTT法检测细胞活力。结果:1.不同浓度的山楂酸（0-30μmol/L）刺激细胞,与对照组相比,BRL-3A细胞活力无显著变化,表明0-30μmol/L的山楂酸对细胞无明显毒性;不同浓度的山楂酸预作用后,与模型组相比,山楂酸明显增加了细胞活力。2.不同浓度的山楂酸预作用后,与模型组相比,山楂酸明显增加了细胞SOD、CAT活力及GSH含量,降低了LDH活力、MDA含量和ROS水平。3.山楂酸单独作用细胞后,与对照组相比,随着山楂酸作用浓度和时间的增加,核内Nrf2蛋白、HO-1蛋白表达明显升高,胞质Nrf2蛋白表达明显降低。山楂酸预处理后,与模型组相比,山楂酸显著增加了Nrf2、HO-1的mRNA水平及核内Nrf2蛋白、HO-1蛋白的表达,降低了胞质Nrf2蛋白的表达。4.不同浓度的山楂酸预作用后,与模型组相比,山楂酸显著降低了p38及JNK蛋白的磷酸化水平,对ERK蛋白的磷酸化水平无明显影响;SB203580和SP600125处理山楂酸预处理组后,细胞活力显著下降。结论:1.在H2O2诱导的BRL-3A细胞氧化损伤模型中,山楂酸通过降低细胞LDH活力、ROS水平和MDA含量,增加SOD、CAT活力及GSH含量起保护作用。2.山楂酸通过增加Nrf2、HO-1 mRNA的表达,促进Nrf2入核和上调HO-1蛋白的表达起保护作用。3.山楂酸可激活p38、JNK MAPK通路,进而激活Nrf2,诱导HO-1的表达。因此,山楂酸对H2O2诱导的BRL-3A细胞氧化损伤起保护作用,其机制可能与激活p38、JNK MAPK途径以及Nrf2/HO-1信号通路相关。
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