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[目的]采用GeneSOEing技术构建BPI23-haFGF融合基因，通过原核表达系统pGEX-4T-1表达，并对该基因的表达产物进行初步的生物活性研究，为能开发出一种既能缩短创伤愈合时间、提高愈合质量又能避免细菌感染的双功能新型多肽类药物打下基础。
[方法]①采用TRIzol(Invitrogen)试剂一步法，从人外周血白细胞和胎脑组织中分别提取到完整的总RNA，逆转录合成cDNA，用作BPI23和haFGF基因扩增模板。
②根据Genbank公布的杀菌/通透性增加蛋白BPI和人酸性成纤维细胞生长因子haFGFcDNA基因序列，利用PrimerPremier5.0和DNAclub生物学软件设计两对特异性引物，以上述cDNA为模板，RT-PCR分别扩增带信号肽的BPI23和haFGF基因的编码区序列，将目的片段分别克隆入pUCm-T载体，测序，并进行序列分析。
③以pUCm-T/BPI23和pUCm-T/haFGF重组质粒为模板，设计两对特异性引物，运用GeneSOEing技术将两段基因通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3DNA序列进行体外基因重组合成融合基因，克隆入pUCm-T载体，测序，并运用相关生物信息学软件对克隆的序列进行预测分析。
④以pUCm-T/BPI23-haFGF为模板设计一对特异性引物扩增不带信号肽融合基因BPI23-haFGF，并克隆入原核表达载体pGEX-4T-1，构建原核重组表达质粒，在大肠杆菌BL21DE3中诱导表达，表达的重组融合蛋白进行复性和亲和层析柱纯化后，对重组融合蛋白的纯化产物进行SDS-PAGE分析、WesternBlotting鉴定和初步生物活性检测。
[结果]①以人外周血白细胞和胎脑组织中提取到完整的总RNA为模板，经RT-PCR扩增编码BPI23和haFGFcDNA序列，将其分别克隆至pUCm-T载体进行序列测定，RT-PCR扩增得到约700bp的BPI23和480bp的haFGFcDNA片段。分析两个序列，结果表明：BPI23和haFGF编码序列cDNA与Genebank公布序列一致。
②采用GeneSOEing技术将两段基因通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3DNA序列进行体外基因重组，扩增得到约1.2Kb的融合基因片断。序列分析表明BPI23、haFGF及linker拼接组合的顺序，方向及序列完全正确。BPI23-haFGF为1.2kb，始密码子为ATG，终止密码子为TAA，编码399个氨基酸，编码的蛋白质具有信号肽序列以及BPI23和haFGF蛋白保守结构域。预测不带信号肽的BPI23-haFGF序列，编码368个氨基酸，分子量40.36ku，pI为9.45。
③将融合基因BPI23-haFGF去掉信号肽后克隆入原核表达载体pGEX-4T-1，并通过PCR，双酶切和测序鉴定后，成功构建了pGEX-4T-1//BPI23-haFGF重组原核表达质粒。重组质粒转化大肠杆菌后，利用IPTG诱导表达，表达蛋白复性后经GST亲和纯化柱纯化和凝血酶酶切GST-tag后，PAGE分析表明重组蛋白分子量与预期结果基本一致，纯化蛋白琼脂糖平板抑菌实验和MTT法掺入法促NIH3T3细胞增殖实验表明重组蛋白具有抗菌活性和促进成纤维细胞分裂增殖的作用。
[结论]①扩增得到了与Genebank公布序列一致的BPI23和haFGF两个基因的cDNA序列，为进一步的基因融合打下了坚实的基础。
②利用GeneSOEing技术成功构建了中间带有疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的BPI23-haFGF融合基因。
③成功构建了pGEX-4T-1//BPI23-haFGF重组原核表达质粒，进行了表达并获得了目的蛋白。
④复性纯化后的蛋白表达产物初步生物学活性实验表明：融合基因表达产物具有抗菌活性和促进成纤维细胞分裂增殖的作用。