病毒性腹泻病是人和动物最常见的疾病之一,由于其较高的发病率和致死率,给人类健康和养殖业生产造成了严重的威胁。目前,对于引起婴幼儿腹泻的相关病毒的研究较多,常见的引起腹泻的病毒包括轮状病毒、杯状病毒、星状病毒、肠道腺病毒、肠道病毒等,其中轮状病毒是引起人和猪腹泻的最重要的病毒。但是在一些地区的腹泻暴发中,虽然经流行病学调查和传统的检测方法鉴定为病毒性腹泻,却始终未从患病机体中检测出病毒抗原。新出现的病毒一般都具有暴发性等特点,所以对病毒进行快速有效的鉴定是预防和控制的关键。目前对病毒的检测方法主要有电镜观察、血清学、原位杂交及PCR等,随着大量病毒基因组数据库的建立,为快速有效的鉴定人类已知病毒抗原奠定了坚实的基础,同时为鉴别未知病毒病原提供了可能。目的:建立和优化不依赖于特定核酸序列的病毒检测的技术平台,用于未知病毒,和已知病毒变异株的发现和鉴定。方法:基于将非序列依赖性PCR扩增的方法与基因文库的构建相结合,对每一个标本中可能存在的核酸片段进行PCR扩增,条带回收、克隆、测序。最后将得到的单一序列在NCBI GenBank中进行比对分析,从中找出可能的新病毒或者已知病毒的变异株。对获得的新的序列进行特异性引物设计,再回到筛选中选取的标本中进行PCR扩增,筛查阳性标本。结果:建立了不依赖于特定核酸序列的病毒检测技术平台,可以成功检测到六种人常见的腹泻相关病毒:博卡病毒、肠道腺病毒、杯状病毒(诺如病毒)、星状病毒、轮状病毒、柯萨奇病毒。得到序列阳性率为35.31%。利用该技术平台对河北卢龙猪的轮状病毒阴性标本进行检测,得到了一株猪的扎如病毒,其序列分析结果提示可能为一个新的型别;同时发现了一个新的猪kobuvirus,随后利用得到的序列进行引物设计,通过RT-PCR检测了卢龙322份猪的粪便标本,该病毒阳性率为30.12%结论: 1.成功建立了粪便标本中不依赖于特定核酸序列的病毒检测技术平台; 2.运用该技术平台发现了新的猪kobuvirus和一株新型别的猪扎如病毒。