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乙型脑炎病毒(JEV)属于黄病毒科黄病毒属的成员,是一种危害严重的人畜共患病病原。该病毒严重危害人类健康,感染人后入侵中枢神经系统,造成死亡或者是留下严重的神经系统后遗症。同时它可以感染猪群,造成种猪繁殖障碍,最终导致养猪业的巨大经济损失。miRNA是基因在转录后水平调控的一种重要方式,在细胞生长、分化、细胞凋亡及代谢等生命过程中都起着重要作用。miRNA在病毒感染入侵及宿主细胞的抗病毒等方面也发挥着调节作用。而目前对于JEV诱导细胞niRNA表达谱的研究暂无报道,相关研究对于深入认识JEV的致病机制十分重要。本研究具体内容如下：将JEVP3和SA14-14-2毒株分别感染U251细胞后,提取总RNA,通过solexa测序技术,鉴定出JEV诱导U251的miRNA表达谱的变化情况,发现了其表达谱的基本特征。与对照组相比,有161个miRNA在JEV P3感染时发生了改变,175个miRNA在JEV SA14-14-2感染时发生了改变。而与SA14-14-2感染相比,P3感染诱导了76个miRNA的改变,其中60个miRNA表达上调,16个miRNA表达下调。通过实时荧光定量PCR对部分差异表达的miRNA进行了验证。在miRNA表达谱的分析中,JEV P3能够诱导U251细胞中miR-487b的显著上调。利用软件预测发现miR-487b能够靶向病毒的NS3基因,并且靶位点具有一定的保守性。进一步通过双荧光素酶报告系统检验发现miR-487b确实能够作用于NS3基因并抑制其表达,突变该位点后,抑制效果就被解除。将人工合成的miR-487b转染到细胞中后可以明显的下调病毒基因及蛋白的表达水平,抑制病毒复制,使病毒滴度明显降低。miR-487b能够有效的抑制JEV在细胞中的增殖水平,有望成为一种治疗JEV感染的手段。