禽流感(Avian Influenza,AI)是由A型流感病毒引起的禽类的感染和/或疾病综合征,广泛流行于世界上许多国家和地区,给养禽业造成了巨大的经济损失。高致病力禽流感(HPAI)多以突然发病和高死亡率为主要特征,常常导致感染鸡群的全群覆没,被国际兽疫局列为A类烈性传染病。近几年来,在我国的一些地区也相继出现了AI的流行, 1997香港禽流感直接传播给人并致人死亡事件的发生,更加突出了AIV的公共卫生学意义。目前,H5亚型高致病性禽流感成为研究的焦点,而H7亚型高致病性禽流感的研究报道较少,其相关的生物制品比较匮乏。虽然近年来H7型未出现大规模的流行,但禽流感不同亚型的流行变幻莫测,本研究构建的H7亚型重组禽痘活载体疫苗将为我国H7亚型高致病性禽流感的防治提供物质储备和技术支持。本研究将我国H7亚型禽流感分离株A/Chicken/Hebei/1/02(H7N2)的HA基因克隆到pSY538质粒上,把含有禽痘病毒启动子P11的LacZ基因克隆到质粒pSY538-HA的SmaI位点,然后切下同时含有HA和LacZ基因的片段再克隆到禽痘病毒载体pSY681的NotI位点,构建出禽痘病毒转移载pSY681-HA7-LacZ。将重组质粒与亲本禽痘病毒S-FPV-017共转染鸡胚成纤维细胞,进行同源重组,通过加入X-gal进行阳性重组病毒的筛选、纯化,获得了遗传性状稳定的表达H7亚型HA基因的重组禽痘病毒rFPV- H7HA。提取重组病毒的总DNA进行PCR扩增,获得了1.7kb的携带有外源目的基因片段,证明所获得的重组病毒携带有外源目的基因片段;Western blot检测结果表明:重组痘病毒能在体外的CEF细胞有效表达HA糖蛋白。分别用106、104、102的PFU剂量的重组病毒rFPV- H7HB免疫4周龄SPF鸡,4周后分别用100LD50的HPAIV A/FPV/Rostock/34 (H7N1)鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化,对重组病毒的免疫保护效果进行全面评估。结果,不同剂量的重组病毒免疫后均可诱导出较高水平的HI抗体,抗体效价在免疫后可达到6lg2,而且其AGP抗体均为阴性;在病毒攻击后免疫鸡无一发病和死亡,攻毒保护率为100%,病毒分离和滴定结果显示所有免疫鸡没有发生排毒;而对照组全部发病并在攻毒后3-8天相继死亡,发病率和死亡率均为100%,并在其泻殖腔和喉头拭子中均分离到了较高滴度的病毒。本试验研究结果表明,稳定高效表达我国H7亚型禽流感分离株A/Chicken/Hebei/1/02(H7N2)HA基因的重组禽痘病毒rFPV- H7HA能有效诱导机体的体液免疫反应,可以对H7亚型高致病性病毒的攻击产生100%的免疫保护,此重组活载体疫苗可为我国H7亚型高致病性禽流感的防制提供必要和有效的物质技术储备。