甲状腺机能亢进症是当前最常见的甲状腺疾病之一。目前尚缺乏针对性的治疗药物，常规抗甲状腺药物无法解决甲状腺细胞过度增殖和甲亢复发问题。林兰教授从医50余载，对甲亢的治疗等方面认识深刻，研发了许多有效的治疗方剂，中药甲亢宁胶囊（以下简称“甲亢宁”）即是其防治甲亢的临床经验的精髓之一。本论文首先对导师林兰教授治疗甲亢的经验进行了系统的整理，然后以体外培养的FRTL-5甲状腺细胞作为研究对象，从干扰和过表达两个方面，探讨甲亢宁通过调控ERK信号通路，抑制甲状腺细胞增殖、促其凋亡从而调节甲状腺细胞生长的可能分子机制。　　1.临床研究　　目的:基于导师林兰教授治疗甲亢的临床资料，通过数据分析，总结其治疗甲亢的方药运用规律。结合与导师交流，人机结合，以人为主，总结其治疗甲亢肝损害、甲亢合并白细胞减少症、甲亢合并突眼、甲亢伴月经病等的临床经验。为总结和提炼甲亢中医药防治规律提供循证依据。　　方法:将2013年12月-2015年12月林兰教授在广安门医院内分泌门诊确诊的160例甲亢患者的437诊次的病例录入EXCEL2007表格。利用SPSS19.0软件、weka3.7数据挖掘软件、Liquorice数据挖掘软件，运用频数分析、聚类分析、关联规则、复杂网络等方法分析林兰教授处方用药规律。通过与导师交流，整理导师治疗甲亢、甲亢合并肝损害、甲亢合并白细胞减少症、甲亢合并突眼、甲亢伴月经病等的临床经验。　　结果:(1)筛选出符合标准的甲亢病例160例，得到治疗本病所涉及的中药167味，使用总频次为9032次，其中频数在10次以上的药物共有64味，总频数为8634次。其中生龙骨、煅磁石、珍珠母、麦冬、酸枣仁、五味子、夏枯草、法半夏、山慈菇等是林老治疗甲亢的核心药物。(2)将林教授437诊次治疗甲亢的处方中所有中药按照药物出现的总频次进行排序，频次超过10次的作为高频中药。参考第七版《中药学》教材及《中华本草》，将69味高频中药按照功效进行分类，并将各类中药中的所有药物使用频次加和并排序。统计结果显示，林兰教授治疗甲亢使用最多的是补虚药、安神药，其次为清热药、活血化瘀药、平肝息风药等。在补虚类药物使用上，以用补血药和补阴药为主，补气药和补阳药为次。林教授治疗甲亢常用具有滋阴潜阳、安神功效的中药。(3)采用SPSS19.0软件对高频中药进行聚类分析，结果显示林兰教授的治疗甲亢的处方分为九类:益母草、丹皮、山萸肉、紫河车、当归;盐杜仲、泽泻、炒白术、覆盆子、益智仁、香附、黄连、木香、红花、川芎、檀香、生黄芪、制远志、决明子;茵陈、黄柏、生牡蛎、珍珠母;白芍、生龙骨、五味子、夏枯草、麦门冬、太子参、柏子仁、酸枣仁;山慈菇、牛蒡子;枸杞子、煅磁石、钩藤;郁金，元胡;半夏，枳实。(4)采用Liquorice数据挖掘软件对高频中药进行分析，结果显示林兰教授的治疗甲亢的核心处方以滋阴潜阳、化痰散结、益气养阴功效为特点，生龙骨、煅磁石、夏枯草、枸杞子、钩藤、太子参、麦冬、白芍、五味子、生地、熟地、柏子仁、酸枣仁是最常见的方剂组合。(5)采用weka3.7数据挖掘软件，运用关联规则方法分析常用药对，并结合与导师交流，总结出林教授临床常使用的药对为:熄风潜阳组合—生龙骨、煅磁石;化痰散结组合—山慈菇、牛蒡子、浙贝母、连翘;疏肝理气组合—柴胡、白芍;理气化痰组合—半夏、枳实、郁金、元胡;益气养阴组合—太子参、麦冬、五味子;健脾燥湿组合—苍术、厚朴;安神组合—生龙骨、生牡蛎、煅磁石、珍珠母;酸枣仁、柏子仁;健脾化湿组合—茯苓、泽泻;滋补肝肾组合—覆盆子、益智仁、杜仲;养肝明目组合—枸杞子、决明子;祛风明目组合—青葙子、密蒙花。(6)通过与导师交流，总结了导师治疗甲亢分气滞痰凝、阴虚阳亢、阴虚火旺、气阴两虚四型论治，重视化痰活血，强调配合西药治疗。导师治疗甲亢合并突眼，强调辨主症论治。治疗甲亢合并肝损害，提倡分期论治。治疗甲亢伴白细胞减少症，以益气滋阴养血为治疗大法。治疗甲亢伴月经病，应用甲状腺药物维持治疗的同时，运用中药人工周期疗法。　　结论:本课题首次利用频数分析、聚类分析、关联规则、复杂网络等数据挖掘技术，对林兰教授治疗甲亢的临床用药规律进行了分析，并结合口传心授，总结出了林兰教授对甲亢、甲亢突眼、甲亢合并肝损害、甲亢合并白细胞减少、甲亢伴月经病的处方用药规律和治疗体会。　　2.实验研究　　目的:从ERK信号传导通路探讨中药甲亢宁胶囊治疗甲亢的分子机制。　　方法:以原代培养的FRTL-5细胞为研究对象，采用CCK-8法筛选出甲亢宁抑制FRTL-5细胞增殖的最佳浓度，作为干预FRTL-5细胞的药物浓度。实验共设立对照组(Con)、甲亢宁组、甲亢宁+ERK1/2-siRNA组、siRNA阴性序列组(NC)、siRNA干扰组、过表达慢病毒组、甲亢宁+过表达慢病毒组、空病毒组(NC)等组别，分别采用CCK-8法检测甲亢宁对各组细胞增殖情况的影响、放免法测定各组细胞上清中的cAMP释放量、AV/PI双染法测定各组细胞凋亡率、Western Blot法以及RT-qPCR法观察ERK通路上增殖、凋亡相关基因(c-Raf、p-ERK1/2、ERK1/2、Caspase-9、CyclinD1、Bcl-2、Bax) mRNA和蛋白表达的变化。以ERK1/2为切入点，利用RNAi技术阻断ERK信号传导通路，并应用慢病毒载体对ERK信号传导通路进行过度活化，从ERK1/2基因沉默和过表达两方面研究甲亢宁调控FRTL-5细胞ERK通路的机制。　　结果:(1)本实验采用原代培养出的FRTL-5细胞，冻存了足够的细胞，为后续的实验研究奠定了基础。(2)本实验采用CCK-8法检测法观察出不同甲亢宁浓度、不同干预时间的FRTL-5细胞增殖情况，经过重复实验，最终确定以5.438mg/ml的含甲亢宁的F12完全培养基干预的第24h作为FRTL-5细胞的干预浓度最为适宜。(3)采用CCK-8法证实了甲亢宁对FRTL-5细胞增殖具有抑制作用。(4)采用AnnexinⅤ/PI双染法检测了甲亢宁对转染ERK1/2-siRNA和感染ERK1/2过表达慢病毒的FRTL-5细胞凋亡的影响，结果显示，与对照组相比，甲亢宁组细胞发生凋亡(P＜0.01)，经ERK1/2-siRNA干扰后FRTL-5细胞发生凋亡，甲亢宁协同组细胞凋亡更加显著(P＜0.05)，ERK1/2-siRNA组、ERK1/2-siRNA阴性序列组的凋亡率与对照组相比增加但无统计学意义。与甲亢宁组相比，甲亢宁+ERK1/2-siRNA组、甲亢宁+ERK1/2慢病毒组的细胞凋亡率差异无统计学意义，其余各组的细胞凋亡率与甲亢宁组相比差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。与ERK1/2-siRNA阴性序列组相比，甲亢宁+ERK1/2-siRNA组细胞的凋亡率明显升高(P＜0.01)。与空病毒组相比，甲亢宁组、甲亢宁+ERK1/2-siRNA组的凋亡率明显升高(P＜0.01)。(5)采用放免法测定各组细胞上清中的cAMP释放量，与对照组相比，ERK1/2-siRNA组、ERK1/2-siRNA阴性序列组的cAMP释放量无显著差异，其余各组的cAMP释放量与对照组相比，均有所降低，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，其中甲亢宁组的cAMP释放量降低最为显著。与甲亢宁组相比，对照组、ERK1/2-siRNA组、ERK1/2-siRNA阴性序列组的cAMP释放量差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。(6)RT-qPCR法检测结果显示，与对照组相比，甲亢宁组、ERK1/2-siRNA组、甲亢宁+ERK1/2-siRNA组的c-Raf、 ERK1、ERK2、CyclinD1、Bcl-2 mRNA表达量均显著降低(P＜0.01);甲亢宁组的BaxmRNA、Caspase-9mRNA表达量增高但无统计学意义，ERK1/2-siRNA组、甲亢宁+ERK1/2-siRNA组的BaxmRNA、Caspase-9mRNA表达量显著增高(P＜0.01);与对照组相比，过表达慢病毒组、甲亢宁+慢病毒组的c-Raf、 ERK1、ERK2、Bax的mRNA表达量明显增高(P＜0.01)，CyclinD1mRNA、Bcl-2mRNA的表达量明显降低(P＜0.01)。(7) WesternBlot法检测结果显示，甲亢宁组、ERK1/2-siRNA组、甲亢宁协同组的c-Raf、p-ERK1/2、ERK1/2、CyclinD1、Bcl-2的蛋白表达均显著下调(P＜0.01);甲亢宁组的Caspase-9蛋白表达量增高(P＜0.01)，ERK1/2-siRNA组、甲亢宁协同组Bax、Caspase-9的蛋白表达显著上调(P＜0.01);与对照组相比，过表达慢病毒组、甲亢宁+慢病毒组的c-Raf、 p-ERK1/2、ERK1/2、Bax的蛋白表达明显上调(P＜0.01)，CyclinD1mRNA、Bcl-2的蛋白表达明显下调(P＜0.01)。　　结论:ERK1/2-siRNA可以协同甲亢宁所致的抑制FRTL-5细胞增殖、促其细胞凋亡的作用;ERK1/2的过表达使FRTL-5细胞获得更高的增殖与抗凋亡能力，对甲亢宁的抗药性显著增加;甲亢宁对ERK1/2的磷酸化起阻断作用，甲亢宁通过调控ERK1/2的表达从而调节FRTL-5细胞中c-AMP、c-Raf、 Bax、Bcl-2、Caspase-9及CyclinD1的表达，而抑制FRTL-5细胞增殖、促进其凋亡，从而改善甲状腺细胞动力学平衡，调控甲状腺细胞生长。