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目的:建立急性放射性肠炎小鼠模型,采用16S r RNA测序技术研究葛根芩连汤对放射性肠炎小鼠肠道菌群的调节作用,为葛根芩连汤的临床应用提供理论及实验依据。材料与方法:将41只SPF级的雄性BALB/c小鼠按照体重排序随机分成六组,分别为空白对照组（6只）、模型对照组（7只）、低剂量葛根芩连汤组（7只）、中剂量葛根芩连汤组（7只）、高剂量葛根芩连汤组（7只）及蒙脱石散组（7只）[1]。每组小鼠给予SPF级饲料及纯净水喂养,饲养一周后,建立急性放射性肠炎小鼠模型。造模前小鼠禁食24h,除空白对照组不予以照射处理,其余五组小鼠麻醉后,采用6MV高能X线直线加速器进行11Gy单次全腹部照射。各组均于照射后次日开始灌胃,空白对照组和模型对照组均给予0.9%生理盐水0.5ml灌胃,低、中、高剂量葛根芩连汤组分别给予0.25g/ml、0.75g/ml、1.25g/ml浓度葛根芩连汤0.5ml灌胃,蒙脱石散组给予0.05g/ml浓度蒙脱石散混合液0.5ml灌胃,每日一次,共给药一周[2]。期观察小鼠体质量、排便情况及自由活动度等一般情况,记录每日DAI评分。一周后收集每只小鼠的新鲜粪便,于-80℃超低温冰箱冻存,通过16S r RNA高通量测序,分析和比较各组小鼠肠道菌群的构成、丰富度及多样性。采集小鼠血液进行内毒素（ET）检测,留取各组小鼠小肠组织,分成两部分,一部分进行常规切片HE染色,光镜下观察小肠组织的形态学改变[3],另一部分做组织匀浆,进行一氧化氮（NO）检测。结果:1.小鼠一般情况观察:照射后各组小鼠均出现不同程度的饮食饮水量下降、体质量减轻、软便、肛周不洁、弓背、毛发凌乱及蜷缩少动等表现,照射后第6天开始有所改善。2.小鼠体质量分析结果:照射后第1天,各组小鼠体质量未见明显差异（P＞0.05）。与空白对照组相比其余五组小鼠体质量在照射后第2-5天内明显下降,第6天开始略有回升,具有统计学意义（P＜0.05）。3.DAI评分结果:模型对照组的DAI评分明显高于空白对照组,具有显著性差异（P＜0.0001）。各给药组的DAI评分均低于模型对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。低剂量葛根芩连汤组的DAI评分明显高于与高剂量葛根芩连汤组和蒙脱石散组,具有统计学意义（P＜0.05,P＜0.0001）。中剂量葛根芩连汤组DAI评分高于高剂量葛根芩连汤组及蒙脱石散组,差异具有统计学意义（P＜0.05,P＜0.0001）[4、5]。4.小肠组织形态学结果:光镜下观察空白对照组小鼠的小肠绒毛长而整齐,隐窝结构清晰无破坏,上皮细胞排列整齐,腺体结构正常,未见炎性细胞浸润和聚集[6]。模型对照组小鼠小肠绒毛变短、倒伏或缺失,隐窝和上皮细胞破坏,腺体多数不完整,甚至缺失,炎症细胞广泛浸润,肌层明显变薄。各给药组小鼠小肠绒毛稍变短,隐窝及上皮细胞较完整,炎症细胞少量浸润,对比模型对照组得到一定程度的恢复,高剂量葛根芩连汤组较为明显。与空白对照组相比,模型对照组小鼠的小肠绒毛高度明显降低,有显著性差异（P＜0.0001）。对比模型对照组,中、高剂量葛根芩连汤组的小肠绒毛高度明显回调,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。低剂量葛根芩连汤组的小肠绒毛高度小于高剂量组,具有统计学意义（P＜0.05）[5]。模型对照组小鼠的小肠壁全层厚度明显小于空白对照组（P＜0.001）。与模型对照组相比,各给药组的小肠壁全层厚度均有所回调,以中、高剂量葛根芩连汤组及蒙脱石散组较明显,差异具有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。高剂量葛根芩连汤组与蒙脱石散组的小肠壁全层厚度明显大于低剂量组葛根芩连汤组,有统计学意义（P＜0.05）[5]。5.生化指标检测结果:模型对照组小鼠体内ET含量较空白对照组显著增多,有统计学意义（P＜0.0001）。与模型对照组相比,各给药组ET的含量显著减少,结果具有统计学意义（P＜0.001,P＜0.0001）。低剂量葛根芩连汤组ET含量高于中、高剂量葛根芩连汤组及蒙脱石散组,有统计学意义（P＜0.05,P＜0.0001）。中剂量葛根芩连汤组ET含量高于高剂量葛根芩连汤组及蒙脱石散组,结果具有统计学意义（P＜0.05）,高剂量葛根芩连汤组和蒙脱石散组ET含量无明显差别,不具有统计学意义（P＞0.05）[7]。与空白对照组相比,模型对照组小鼠体内的NO含量显著增多,结果具有统计学意义（P＜0.0001）。对比模型对照组,各给药组的NO含量较显著减少,具有统计学意义（P＜0.05）,但各给药组间未见明显差异,结果无统计学意义（P＞0.05）[8]。6.16S r RNA高通量测序结果:在门分类水平上,各组的优势菌门为厚壁菌门Firmicutes、拟杆菌门Bacteroidetes、变形菌门Proteobacteria[6]。与空白对照组相比,模型对照组中厚壁菌门（28.42±13.18）、拟杆菌门（28.12±7.70）丰度降低,有统计学意义（P＜0.05）。与模型对照组比较,葛根芩连汤各给药组厚壁菌门丰度增加（P＜0.05）,蒙脱石散组虽也有上升趋势,但未见明显差异,高剂量葛根芩连汤组（49.94±13.55）及蒙脱石散组（58.31±25.25）拟杆菌门丰度增加（P＜0.05）,中、高剂量葛根芩连汤组放线菌门Actinobacteria（0.09±0.05、0.09±0.12）丰度降低（P＜0.05）。中剂量葛根芩连汤组厚壁菌门（53.32±7.20）丰度对比蒙脱石散组（34.8±24.29）明显增加,有统计学差异（P＜0.05）。Alpha多样性分析提示,与空白对照组相比模型对照组肠道菌群的丰度及多样性下降,高剂量葛根芩连汤组及蒙脱石散组能够有所改善。PCo A分析显示空白对照组与模型对照组之间距离较远,说明菌群组成不相似,造模后小鼠肠道菌群发生扰动。在属分类水平上,与空白对照组相比,模型对照组乳酸杆菌属Lactobacillus（7.65±5.78）、拟杆菌属Bacteroides（2.14±0.92）、双歧杆菌属Bifidobacterium（0.02±0.02）及普雷沃氏菌属Prevotella（0.29±0.22）的丰度减少（P＜0.05）,肠球菌属Enterococcus（1.04±0.06）、埃希氏菌属Escherichia（1.19±1.51）的丰度增加（P＜0.05）[9]。与模型对照组相比,葛根芩连汤各给药组乳酸杆菌属、拟杆菌属丰度显著增加（P＜0.01,P＜0.05）,低剂量葛根芩连汤组（6.45±11.96）及蒙脱石散组普雷沃氏菌属（1.82±1.09）丰度显著增加（P＜0.01,P＜0.05）,高剂量葛根芩连汤组双歧杆菌属（0.31±0.01）丰度增加（P＜0.05）,各给药组肠球菌属、埃希氏菌属丰度降低（P＜0.05）。低、中剂量葛根芩连汤组双歧杆菌属（0.05±0.02、0.04±0.01）的丰度明显低于高剂量葛根芩连汤组,有统计学意义（P＜0.05）,其余菌属丰度改变未见明显剂量相关性。结论:1.采用6MV高能X线局部单次大剂量照射方法,能够成功建立放射性肠炎小鼠模型。2.葛根芩连汤可以有效改善放射性肠炎小鼠的一般症状及组织病理学表现,降低DAI评分、ET及NO含量,且在不同剂量实验中,高剂量葛根芩连汤组的效果最明显。3.16S r RNA高通量测序结果显示,模型对照组小鼠肠道菌群的丰度及多样性降低,肠球菌属及埃希氏菌属（条件致病菌）的丰度增加,乳酸杆菌属、拟杆菌属、双歧杆菌属及普雷沃氏菌属（益生菌）的丰度下降。提示放射性肠炎的发生与肠道菌群组成的改变密切相关,肠球菌属及埃希氏菌属的丰度与放射性肠炎的发生呈正相关,乳酸杆菌属、拟杆菌属、双歧杆菌属及普雷沃氏菌属的丰度与放射性肠炎的发生呈负相关[10、11]。4.葛根芩连汤可以通过增加乳酸杆菌属、拟杆菌属、双歧杆菌属及普雷沃氏菌属的丰度,降低肠球菌属、埃希氏菌属的丰度,纠正肠道的微生态失衡,达到治疗放射性肠炎的目的。其中双歧杆菌丰度与葛根芩连汤用药剂量呈正相关,高剂量葛根芩连汤组具有一定的优势,可作为放射性肠炎的潜在标志物种。