目的:研究斑蝥酸钠维生素B6联合优替德隆对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,运用网络药理学和分子对接研究等方法分析斑蝥治疗乳腺癌的潜在作用机制。方法:1.运用CCK-8法检测斑蝥酸钠维生素B6、优替德隆对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖的影响,并分别计算出IC50值。选取适当的斑蝥酸钠维生素B6浓度与优替德隆联合,检测联合组抑制率。用流式细胞术检测斑蝥酸钠维生素B6、优替德隆单药以及斑蝥酸钠维生素B6联合优替德隆对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株细胞周期以及凋亡的影响。2.通过检索TCMSP筛选斑蝥的有效化学成分和靶点,在Genecards数据库中检索出乳腺癌的相关靶基因,运用Cytoscape3.7.1软件构建斑蝥“化合物-靶点”网络图和蛋白网络互作分析（PPI）,运用David数据库进行GO和KEGG富集分析,应用Auto Dock Vina进行分子对接,最后运用Py MOL、Lig Plot+软件对对接结果进行三维可视化分析。3.运用Western Blot方法对网络药理筛选出的7个基因中的BCL2和BAX进行了验证,此外对细胞周期及细胞凋亡的相关信号通路蛋白p21、p27、cyclin D1、bcl-xl进行了检测,探究分子机制的变化。结果:1.斑蝥酸钠维生素B6注射液IC5024h为:10.05μmol/L,IC5048h为:7.485μmol/L。优替德隆IC5024h为:37.61μmol/L。IC5048h为:20.26μmol/L。2.将浓度为10μmol/L的斑蝥酸钠维生素B6注射液分别与浓度为0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L的优替德隆联合后,优替德隆的IC5024h为:1.022μmol/L,IC5048h为:1.01μmol/L。3.细胞周期检测结果显示:与对照组比较,联合组在G2/M期占比可达46.8%,较单药组明显增高,较斑蝥单药组增高了21.2%,较优替德隆单药组增高了27%,斑蝥酸钠和优替德隆均可使细胞阻滞在G2/M期,且斑蝥酸钠可以增强优替德隆诱导的G2/M周期阻滞。4.流式细胞术检测结果显示:在药物作用于细胞24h后,10μ/L的斑蝥酸钠维生素B6注射液、0.1μmol/L的优替德隆注射液单药诱导的细胞凋亡率分别为8.91%、13.8%。与对照组、斑蝥酸钠单药组、优替德隆单药组相比,斑蝥酸钠维生素B6联合优替德隆诱导的细胞凋亡率为78.4%。5.网络药理学和分子对接分析得出斑蝥有效成分5个,相关靶点31个,乳腺癌靶点1123个,拓扑分析出79个核心靶点信息,GO分析共包含81条生物过程、12条细胞组分、23条分子功能,59条KEGG富集结果,涉及Pathways in cancer、Micro RNAs in cancer等信号通路。分子对接结果显示cantharidin（斑蝥素）与Bax、Bcl-2、PTGS2的结合能较低,表明它们具有较好的结合活性,提示Bax、Bcl-2、PTGS2是斑蝥发挥作用的重要靶点。6.Western Blot结果显示:Bax在对照组与单药组中表达较弱,而在联合组中表达显著增强,而Bcl-2与Bcl-xl在联合组中表达被显著下调。P21、P27作为细胞周期抑制蛋白在联合组中明显上调。cyclin D1在联合组中表达下调。结论:斑蝥酸钠可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,且斑蝥酸钠联合增强化疗药物优替德隆抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长增殖,且导致细胞主要阻滞于G2/M期。斑蝥酸钠也可增强优替德隆对细胞早期凋亡的诱导。网络药理学和分子对接预测出斑蝥能够通过癌信号等通路调控BAX和Bcl-2调控具有抗乳腺癌的作用。体外实验证明斑蝥抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长发展进程的分子机制可能与其有效调控Bcl-2、Bax蛋白有关。本研究通过对斑蝥酸钠维生素B6联合优替德隆抑制三阴型乳腺癌的作用及机制探究,为进一步研究其治疗乳腺癌优化治疗策略提供了一定理论基础。