[目的]前列腺癌（prostate cancer,PCa）的确诊依赖有创的前列腺穿刺活检,因此用于初步诊断前列腺癌并指导穿刺活检的肿瘤标志物显得至关重要,寻找高度特异的生物标志物用于PCa的诊断成为了研究热点。本课题通过数据非依赖采集（Data Independent Acquisition,DIA）技术对 PCa 及前列腺增生（Benign prostatic hyperplasia,BPH）患者的前列腺液进行蛋白组学的研究分析比较,初步筛选出PCa患者前列腺液中明显过表达的蛋白。再采用生物信息学分析从中挑选出与PCa联系更加密切的蛋白基因,并用定量逆转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR）及组织芯片免疫组化技术验证其表达差异。旨在为PCa的临床诊断寻求更优的肿瘤标志物,进一步提高PCa的诊断效能。[方法]（1）采用DIA定量蛋白组学技术对6例PCa和6例BPH患者的前列腺液样本进行分析,比较两组之间的蛋白表达差异,将表达倍数（Fold change,FC）＞1.5倍（P-value＜0.05）作为筛选标准初步筛选出PCa组明显过表达的蛋白,利用生物信息学软件对DIA质谱（mass spectrometry,MS）中鉴定出的所有蛋白进行GO（Gene Ontology）KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）等分析。（2）利用癌症基因组图谱数据库（The cancer genome atlas,TCGA）及基因型组织表达数据库（Genotype-Tissue Expression,GTEx）对初步筛选出来的显著高表达蛋白进行分析比较,挑选出5个与PCa联系更加密切的蛋白基因。（3）应用qRT-PCR对8例PCa、8例BPH患者的前列腺液和16例PCa患者的前列腺癌组织及配对癌旁组织样本进行5个蛋白基因的表达验证。（4）应用90例前列腺癌及癌旁组织构成的组织芯片对5个蛋白进行免疫组化验证。[结果]1、通过应用DIA高通量MS分析,初步筛选出PCa组前列腺液中表达量明显高于 BPH 组的蛋白（TMSB10、MMP9、ACTG1、APOE、TALDO1、PRDX3、ACTR2、APMAP、LMNB1、PGD、PPP1CA、SUB1、VDAC1、RPL28、HNRNPF、ERH、APEX1、DHRS7、TUFM、NCL、RPS21、SRP9、HSD17B4、HSD17B10）。2、参照TCGA和GTEx公共数据库对初步筛选的蛋白再次进行对比及生存分析。得出5个在PCa组织及PCa前列腺液中表达量均高于BPH组的蛋白（MMP9、ACTG1、APOE、LMNB1、PPP1CA）。3、利用qRT-PCR技术将筛选出的5个蛋白的基因进行表达验证。我们从PCa组织及癌旁组织的蛋白基因的相对表达量验证对比中得出4个（MMP9、ACTG1、APOE、LMNB1）显著高表达的蛋白基因。PCa组前列腺液和BPH组前列腺液的蛋白基因的相对表达量验证对比中得出4个（ACTG1、LMNB1、PPP1CA、MMP9）显著高表达的蛋白基因。4、利用组织芯片免疫组化技术对5个（MMP9、ACTG1、APOE、LMNB1、PPP1CA）蛋白进行表达验证,最终得出MMP9、ACTG1、LMNB1蛋白在前列腺癌组织中显著过表达。[结论]本课题通过DIA技术的MS分析筛选前列腺癌与前列腺增生患者前列腺液中的蛋白表达差异,再利用TCGA、GTEx公共数据库及qRT-PCR、组织芯片免疫组化技术对差异蛋白基因的表达进行进一步筛选及验证。最终筛选出ACTG1、LMNB1、MMP9蛋白在前列腺癌患者前列腺液中高表达,且两组间的年龄、PSA、前列腺体积差异比较均无统计学意义（P＞0.05）,可作为前列腺癌诊断的潜在生物标志物。