CmGH18和CmEBF基因在甜瓜果实成熟中功能的初步分析

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甜瓜(Cucumis melo L.)属于葫芦科甜瓜属,在果实成熟特性的研究中是一种重要的模式植物。本研究以甜瓜品种河套蜜瓜(Cucumis melo L.cv.Hetao)为研究材料,利用分子生物学方法研究了CmGH18和CmEBF基因与果实成熟之间的关系。主要研究结果如下:(1)根据甜瓜果实转录组数据筛选出在甜瓜果实生长期、成熟期、呼吸跃变期、以及呼吸跃变后期等四个时期内具有显著差异表达的CmGH18和CmEBF基因。(2)使用甜瓜果实为材料克隆了CmGH18和CmEBF基因的cDNA全长序列。序列长度分别为1097bp、2134bp,编码300、640个氨基酸序列。生物信息学分析蛋白理化性质、跨膜螺旋区、蛋白质二级结构、三级结构以及信号肽与亚细胞定位。同时,使用MEGA6.0与MEME在线软件分析了蛋白CmGH18、CmEBF与其他10个物种相应蛋白质之间的亲缘关系。(3)利用q RT-PCR方法检测基因CmGH18、CmEBF在甜瓜果实不同发育时期的表达量。CmGH18基因在27d果实中表达量最高,CmEBF基因在跃变期果实中表达量最高。(4)成功构建了CmGH18、CmEBF基因的超表达载体pPZP221-CmGH18、pPZP221-CmEBF以及CRISPER/Cas9编辑载体pCRI-CmGH18、p CRI-CmEBF。通过甜瓜子房注射法进行遗传转化,对获得的T1代植株进行PCR检测,阳性率分别为10%、12.5%、40%、41.7%。来源于阳性率高的母果实的T1代种子种植于温室,观察T1代甜瓜的果实成熟相关表型,结果表明CmGH18基因具有促进果实成熟的功能,CmEBF基因具有抑制果实成熟的功能。
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