霍乱弧菌thy A致死平衡系统的构建及病毒来源蛋白的表达

来源 :中国预防医学科学院 中国疾病预防控制中心 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luoyuqingyuan
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thy A基因是细菌家族的管家基因(housekeeping gone),并且高度的保守.该研究以 霍乱弧菌菌苗候选株IEMM101为出发菌株,PCR法克隆了其thy A基因,并对其进行了序列分 析和比较,结果显示核苷酸列以及推导氨基酸序列均与GeneBank已发表序列同源性达100i.利用自杀质粒pKTN701介导的同源重组,缺失了IEM101染色体上thyA基因内部535bp的BglII+StyI片段.反式互补试验和Souther blotting证实了thyA基因的缺失.经乳鼠肠道定居试验和Vero细胞测毒试验表明,thyA基因缺失株IEM101-T与母株IEM101相比,定居能力和毒力上未见明显异常.同时以thyA基因为筛选标志建立了染色体-质粒致死于平衡系统,很好地解 决传统使用抗生素抗性作为选择压力的问题.为了维持各自的空间构象,该研究设计了8个 氨基酸的连接臂(linker)将新疆出血热的s基因置于CTB(霍乱毒素亚单位B)的C端,利用ctxB基因自身的强启动子和信号肽在上述的染色体-质粒致死平衡系统中实现了融合、分泌表达 避免今后新疆出血热的实验室诊断中对具有高度传染性抗原的直接操作.由于CTB无毒、抗 原性强、在粘膜免疫中可起到良好的免疫佐剂作用,该研究还通过6个氨基酸的linker将轮 状病毒的主要保护性抗原VP4融合于CTB的C端,70多KDa的表达产物经Western blotting检测,可分别被抗全CT多抗血清和抗VP4多钪血清所识别,免疫评价有待于进一步深入研究.试 验结果揭示霍乱弧菌菌苗候选株将有可能成为在粘膜免疫中递一种或几种异源抗原的良好载体.
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