目的:有关肌腱愈合机制的研究已有很多报道,由于在体内的研究受很多因素影响,因而已有不少的研究在体外进行。至今对肌腱细胞及成纤维细胞参与肌腱愈合的机制尚不完全清楚。自Dehm 1971年体外培养鸡胚肌腱细胞成功以来,对肌腱细胞的研究逐步深入,其生物学特性也逐步被认识。而体外冲击波对于很多肌腱末端病来说是一种有效的、无创的方法,并取得很好的临床效果,然而很多机制尚未清楚。本研究旨在应用激光共聚焦显微镜对细胞进行形态观察以及通过对细胞增殖及对细胞代谢物TGF-β、Ⅰ型胶原等的检测,反应何种方式体外冲击波能对肌腱细胞的具体代谢影响,为冲击波质量肌腱末端疾病提供新的理论依据。方法:本研究取新西兰大白兔后肢屈肌腱进行原代培养;传代培养后分为A组(ESW干预组)、B组(未干预组);经最适能流密度(0.36mj/mm2,200频次)干预后,采用共聚焦显微镜荧光染色对其进行形态观察;然后对其采用MTT比色法检测A、B两组不同时间点的OD值,比较细胞的增殖差异;在24小时、48小时、72小时、1周四个不同时间点应用ELISA法分别检测细胞iNOs、MMP-1、Col-I的值;采用RT-PCR法结合光密度相对值半定量分析冲击波干预后48小时Col-ImRNA表达量的差异。对上述各部分数据采用相应的统计学方法进行分析。结果:1.组织块置人培养瓶后,倒置显做镜下观察,最早第3天见组织块周边有腱细胞里放射状爬出,与维织块边缘垂直,并向远处贴壁生长,并呈圆形,具有折光性,最迟在第5天就有细胞从组织块周边爬出;消化法培养的细胞,48 h开始贴壁.后逐渐延展为梭形和多角形。在第10天左右细胞即融合成单层,细胞间的间隙非常小,可以传代;在荧光染色核之后用共聚焦显微镜观察,其密度大,有的地方细胞有叠加;从高倍视野中可以清楚的看出细胞长梭行的形态结构。传代后干预组的细胞在细胞数量和形态上的发展均快于对照组,在用hoechst33342染核后的观察中也发现干预组比空白对照组的密度高。72小时以后,细胞渐渐伸出伪足,成多角形。2. MTT法检测发现,经ESW(0.36mj/mm2,200频次)干预后,在24小时、48小时、72小时、1周后4个时间段时间点均检测其OD值,前3个时间点对照组均高于其余各时间点,具有显著性差异(P<0.05),说明ESW干预对于肌腱细胞早期的增殖速度和数量都有明显的促进作用;3. ELISA法检测结果,A、B两组细胞经ESW干预24小时、48小时、72小时、1周后4个时间段收集培养上清分别检测细胞iNOs、MMP-1、Col-I的值,各时间点(除1周时间点)对照组均高于实验组,有显著性差异(P<0.05);4. Col-1mRNA的表达,ESW干预后48小时,A、B两组均检测到Col-1mRNA表达,后期表达均逐渐增强,A组明显强于B组;肌腱胶原在整个生长过程中均表达,但是在ESW干预后48小时达到峰值,72小时后进入平台期。结论:1、适当强度的ESW可促进肌腱细胞增殖;2、预实验对冲击波干预的能级及频次的筛选是实验的关键步骤;3、体外冲击波在早期对肌腱细胞代谢具有明显的促进作用,iNOs、TGF -β等一系列表达产物明显增强,从而促进了胶原蛋白的合成,初步证明了肌腱的早期愈合跟TGF -β等代谢物分泌增强有关,然而实验也证实了在这些因子增加的同时MMP-1也在早期增加,可能在早期抑制细胞增长,而后期将对细胞的重塑发挥重要作用。4、本研究结果表明,体外冲击波促进肌腱细胞增殖的原因可能是促进了NO等介质表达增强,从而启动了其他细胞因子,加速了胶原蛋白等细胞基质的合成,为临床ESWT治疗肌腱末端疾病提供了一定的理论依据。