浙江地区人巨细胞病毒糖蛋白H基因分型及其与婴儿HCMV肝炎的关系研究

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目的:人巨细胞病毒(HCMV)感染在我国儿童中相当普遍,多发生于婴儿时期。肝脏是婴儿HCMV感染的重要靶器官之一,由HCMV引起的肝脏疾病,是目前我国婴儿中最常见的一种肝脏疾病,严重影响了我国儿童的健康。HCMV大部分基因序列高度保守,但部分基因序列呈现一定的多态性,如编码包膜糖蛋白的基因。目前许多研究证实病毒基因序列多态性与其不同致病模式相关联。本课题拟通过研究婴儿人巨细胞病毒(HCMV)临床分离株包膜糖蛋白H(gH)的基因多态性,分析该基因不同型别与婴儿HCMV肝炎的关系,为进一步了解HCMV致病机理及亚单位疫苗研究提供参考。方法:1、收集浙江户籍HCMV肝炎患儿的新鲜尿标本。所有患儿尿定量HCMV-DNA检测阳性,血清HCMV-IgM和抗凝外周血PP65抗原检测中一项或两项阳性,均有不同程度的肝功能损害;2、 建立Taqman探针荧光定量PCR检测gH基因型的方法。在HCMV gH基因保守区设计引物,可变区设计分别针对gHl和gH2型的荧光探针,采用荧光定量PCR技术建立HCMV gH基因型的检测方法;3、用Taqman探针荧光定量PCR技术检测HCMV临床分离株gH基因型,凝胶电泳分析gH基因扩增产物片段,DNA测序分析不同gH基因型的多态性情况;4、统计学分析。利用SPSS17.0统计学软件,对相关资料进行t检验和χ2检验的统计学分析,P<0.05认为具有统计学意义。结果:1、101例标本均被成功分型,其中68例为gHl型HCMV感染,29例为gH2型HCMV感染,4例为两者同时感染。101例临床标本以gHl为主,差异有统计学意义(χ2=67.045,P<0.01);2, HCMV gH基因分型在各年龄组中分布无差异性,均以gH1型为优势型;3、黄疸肝炎组以3个月以下患儿为主,非黄疸肝炎组年龄分布无差异。黄疸型及非黄疸型肝炎组中HCMV gH基因型构成无差异性;4、 gH1型HCMV肝炎ALT、AST数值显著高于gH2型;而gH2型HCMV肝炎TB、DB数值显著高于gHl型HCMV肝炎,差异有统计学意义。结论:1、本研究建立了快速、灵敏、特异地对HCMV临床分离株进行gH基因分型的荧光定量PCR技术;2、本研究中浙江地区婴儿HCMV肝炎病例HCMVI临床分离株gH基因型别以gHl为主,gH基因序列相对保守,但仍存在一定的多态性;3、HCMV gH基因型与婴儿HCMV肝炎临床特征有一定相关性。
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