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表皮生长因子(EGF)结合细胞表面的EGF受体后，触发EGF受体二聚化，激活受体的酪氨酸激酶活性，导致受体C末端酪氨酸残基的自磷酸化。EGF受体通过C端984-996结构域(ABD)的酪氨酸残基和肌动蛋白相互作用，直接和细胞骨架结合。但是结合区域及其附近酪氨酸残基缺失的EGF受体突变体仍结合在去垢剂不溶的细胞骨架组分中。进一步的研究发现，在重组细胞可溶组分中，EGF受体的肌动蛋白结合结构域需要在酪氨酸激酶结构域及C末端大部分区域的共同存在下，结合结构域才能和肌动蛋白相互作用。
本文利用酵母双杂交系统筛选的Tyr1148残基周围序列是另一个和肌动蛋白结合的结构域。通过构建GST融合蛋白，竞争结合实验、GST pulldown等方法分析这一区域在体外和肌动蛋白的结合情况。Tyr1148周围序列在体外可以竞争EGF受体与肌动蛋白结合，是一个新的肌动蛋白结合结构域。进一步实验发现，新的肌动蛋白结合位点在体外与已知肌动蛋白结合位点一样，结合F-actin的亲和力远高于与G-actin结合。这两个结合结构域中酪氨酸残基自磷酸化位点突变后，和肌动蛋白的结合情况表现不同。Tyr992突变为Phe992后，不影响已知肌动蛋白结合结构域和肌动蛋白的结合；但是Tyr1148突变为Phe1148后，完全抑制了新结合区域与肌动蛋白的结合。通过分段分析表明1125-1156是EGF受体新的肌动蛋白结合结构域。生化实验研究蛋白质一蛋白质的相互作用往往需要细胞裂解甚至有去垢剂的存在，这将有可能导致存在的复合物解离或新复合物形成，从而产生假象。利用荧光共振能量转移的方法(FRET)来直接观察EGF受体和肌动蛋白在完整细胞内的结合情况。选择将广泛表达的肌动蛋白与YFP的融合蛋白作为FRET受体，而将全长EGF受体及其两个结构域单个或两个都缺失的突变体与CFP的融合蛋白作为FRET供体。用脂质体转染的方法将质粒共转入COS7细胞，使其瞬时表达。EGF受体融合蛋白弥散分布在细胞质内和细胞膜上，在细胞核周围有大量的聚集。同时可以看到EGF受体融合蛋白和肌动蛋白的融合蛋白共定位存在，但是直接结合只存在于细胞的某些特定区域：正常培养的细胞直接结合主要出现在近核区域，且FRET信号分布较少：受到EGF刺激后，直接结合的位置主要出现在近膜区域，FRET信号强度增强，分布增加。提示了EGF受体与肌动蛋白的结合可能与EGF受体在细胞内活动有关。EGF受体突变体与肌动蛋白的相互作用表明两个肌动蛋白结合结构域的共同存在是EGF受体与肌动蛋白结合所必须的。前面的FRET分析表明EGF受体和肌动蛋白的结合存在某种趋势，可能与EGF受体信号传导途径或EGF受体的内吞途径有关。利用FRET和分离去垢剂不溶的细胞骨架组分的方法来研究EGF受体与肌动蛋白在受体活化后的相互作用以及它们相互作用可能的生物学意义。发现EGF活化EGF受体，诱导肌动蛋白与受体结合，而且随着刺激结合量与时间呈正相关。同时在细胞骨架上结合的EGF受体量随刺激时间延长而增加。较之结合结构域缺失的EGF受体，直接结合肌动蛋白可以更快速、更显著地增加MAPK通路上ErK1/2的磷酸化程度，提示EGF受体和肌动蛋白的结合直接参与了信号传导过程。从EGF受体与细胞骨架在细胞内结合的直接定位，区域化的变化过程还提示直接的相互作用涉及到EGF受体内吞的过程。