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microRNA是一类非常小的内源性RNA分子,近年来研究发现正常皮肤发育需要miRNA参与。microRNA中的Let-7b可通过其靶基因调控动物毛发生长。成纤维细胞生长因子5(FGF5)与动物毛囊周期生长相关。文献报道结合软件预测FGF5是let-7b的靶基因之一,但尚未进行实验验证。本研究利用软件预测let-7b与FGF5结合位点并构建FGF5基因3’-UTR段双荧光素报告载体,转染293T细胞后检测荧光素酶活性。let-7b真核过表达载体转染羊驼成纤维细胞,检测转染后基因FGF5及受体fgfrl表达水平变化,探讨microRNA和毛发生长相关基因相互作用影响羊驼毛生长的机制。本实验研究内容和结果如下：(1)从NCBI核酸库中查找FGF5基因3’-UTR段的碱基序列,用软件设计引物,加入酶切位点连接到pmirGLO载体上。构建let-7b的真核表达载体pcDNA6.2TM-GW/EmGFP,与pmirGLO重组质粒共转染293T细胞。结果证明共转染后细胞组的荧光素酶活性比值是对照组的2.548倍,说明双荧光素报告载体构建成功,并且1et-7b与FGF5为靶向关系。(2) let-7b真核过表达载体转染羊驼成纤维细胞。依据登录的其他物种FGF5与fgfr1序列,软件分析保守区并设计引物,采用实时荧光定量技术检测转染细胞组与未转染组中FGF5和fgfrl基因mRNA表达水平的变化。结果显示转染组FGF5和fgfrl表达水平分别是未转染组的0.287倍和2.251倍,差异极显著(P＜0.01), let-7b负调控FGF5。(3)采用western blot技术检测转染let-7b表达质粒组FGF5和fgfrl蛋白表达量的变化。软件测定蛋白条带灰度值,以P-actin作为内参,半定量分析结果得出：转染组细胞FGF5和fgfrl蛋白平均相对表达量分别是0.224±0.019和0.952±0.152,与未转染组比差异显著(P<0.05),在蛋白水平证明let-7b与FGF5负相关。(4)利用细胞免疫化学技术定性分析转染组和未转染组FGF5表达变化,结果显示：FGF5主要在成纤维的细胞质中表达,并且两组细胞中表达区域及面积有变化,细胞水平验证let-7b下调FGF5。综上所述得出结论：let-7b靶向调控FGF5,且通过负调控FGF5表达从而调节羊驼毛生长。