纳米颗粒扩增金标试纸条的研究与应用

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分子水平的生物学定量检测需要更先进的生物分析方法。近年来在医学、动物检验、食品卫生检验等研究领域中,快速、灵敏、准确的分析方法在检测细菌、病毒和农兽药残留上得到了很广的发展应用。胶体金免疫层析是一种简单、快速的免疫学检测技术,利用金标抗体与抗原的特异反应进行检测。这种方法也广泛地应用在禽畜类疾病的监测诊断中,例如对禽流感病毒、新城疫病毒及牛病毒性腹泻病毒的诊断。胶体金技术比荧光免疫,放射性免疫及酶联免疫法的检测灵敏度低,如果可以使金颗粒扩增,就能实现肉眼可见检测,提高灵敏度。本研究基于胶体金免疫层析法原理,并探索形成了纳米颗粒扩增胶体金免疫层析试纸条制备的技术体系。利用增敏辅助试剂的化学反应使固定在硝酸纤维素膜上的胶体金抗体抗原反应复合物的颗粒原位增长,让胶体金原位所形成的纳米颗粒染色,使金标信号显著增强,提高了检测灵敏度。首先利用金颗粒对蛋白质分子吸附的功能,将一种单克隆抗体与胶体金颗粒结合制备免疫检测探针,然后在硝酸纤维素膜上,喷上包被抗体作为检测线(T线)和羊抗鼠抗体作为质控线(C线)。将被检样品加到样品垫上,样品会沿NC膜流向吸水垫,样品中检测物浓度大于检出限时,金标抗体抗原结合物与固定在T线上的抗体结合,T线显色,呈阳性;样品中检测物浓度小于检出限时,T线不显色,结果为阴性。在增敏步骤中,将一定浓度的氯金酸和抗坏血酸或盐酸羟胺按一定比例混匀(参考专利:200810106529.6),滴加NC膜上进行金颗粒扩大,检测倍数可提高10~100倍。同时,利用紫外可见吸收光谱,透射电子显微镜,商业试纸条的对照测试,交叉性实验等来验证方法的可行性与稳定性。
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