论文部分内容阅读
目的:通过观察丁香降气方对大鼠血清脑肠肽、食管下段组织中Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)、干细胞因子(stem cell factor,SCF)及酪氨酸激酶受体(c-kit)的影响,探讨其对混合反流性食管炎模型大鼠食管和胃动力的调控机制。方法:将32只SD大鼠按体重分层后,随机分为两组:假手术组(8只)和模型组(24只)。通过贲门肌撕开联合十二指肠部分结扎术复制混合反流性食管炎模型。模型建立一周后将模型组剩余存活大鼠再按体重分层随机分为3组:模型加生理盐水组,模型加西药组,模型加中药组。中药组予丁香降气方颗粒剂混悬液干预治疗,西药组予枸橼酸莫沙必利分散片联合奥美拉唑胶囊混悬液灌胃,其余各组给予等量生理盐水,疗程均为14天。干预周期结束后,禁食24h不禁水,予各组大鼠2%葡聚糖蓝0.5ml/只,30min后处死大鼠,腹主动脉取血,取胃内容物及食管下段组织。光镜下观察食管组织病理炎症改变情况;ELISA法检测大鼠血清GAS、MTL、NO、VIP的浓度;通过酶标仪测定胃内残留色素的吸光度对各组大鼠的胃排空率进行评价;电镜观察大鼠食管组织中ICCs细胞的超微结构;western blot法观察大鼠食管组织中c-kit、SCF蛋白表达情况;real-time PCR法观察SCF m RNA、c-kit m RNA的表达情况;应用IBM SPSS Statistics 22.0软件,选择one-way ANOVA对实验结果进行统计分析。若P<0.05则认为差异具有统计学意义。结果:1、一般状态:造模前,各组大鼠体重比较无明显差异。模型建立一周后,与假手术组相比,模型组、西药组和中药组大鼠体重均显著下降。与模型组比较,灌胃第七天和第十四天西药组和中药组大鼠体重均显著增加(P<0.05,P<0.01),中药组与西药组比较差异不明显。2、大鼠食管黏膜病理形态学变化:假手术组大鼠食管黏膜正常,除了上皮细胞层内存在少量炎性细胞外,未见其他病理改变。模型组可见明显鳞状上皮增生,黏膜固有层乳头延伸,黏膜下层可见大量散在的血管,上皮层内见大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润,少数可见黏膜糜烂和溃疡。与模型组比较,中药组和西药组大鼠食管黏膜内炎性细胞浸润明显减少,鳞状上皮增生和固有层乳头层延伸呈轻度表现,少量散在的血管扩张及充血,未发现糜烂和溃疡。3、大鼠的胃排空情况:与假手术组比较,模型组大鼠胃内色素残留浓度增加,胃排空率下降,差异具有统计学意义(P<0.001);与模型组比较,西药组和中药组大鼠的胃内色素残留浓度明显减少,胃排空率则明显增加(P<0.01,P<0.05);中药组与西药组比较差异不明显。4、大鼠血清脑肠肽的浓度变化:与假手术组比较,模型组大鼠GAS、MTL的血清浓度显著降低,NO、VIP显著增加;与模型组比较,西药组和中药组的大鼠血清GAS、MTL浓度明显升高,而NO、VIP显著减少;中药组与西药组比较差异不明显。5、大鼠食管ICCs的超微结构:透射电镜观察结果显示假手术组大鼠ICCs主要分布于黏膜下层、肌间神经丛,细胞核呈椭圆形、星形或不规则形态,细胞核大、核周胞质少,胞质内可见丰富的内质网(ER)、线粒体(Mi)、高尔基体(G)、囊泡等细胞器,细胞膜具有典型的穴样内陷特征(箭头),与周围平滑肌、神经纤维末梢连接紧密。模型组大鼠ICCs超微结构模糊,存在核固缩,核周间隙扩大,胞质溶解,细胞器变性,线粒体肿胀、甚至呈空泡化,内质网扩张、严重者脱颗粒,ICCs与周围细胞之间的缝隙连接松散等异常改变。西药对照组和中药治疗组上述表现则不如模型组明显。6、大鼠食管SCF、c-kit蛋白的表达:与假手术组比较,模型组大鼠食管下括约肌的SCF和c-kit蛋白的表达水平均明显降低(P<0.0001),差异具有统计学意义;与模型组比较,西药对照组的SCF和c-kit蛋白在食管下括约肌的表达水平均显著上调(P<0.05),中药治疗组的SCF、c-kit蛋白呈高水平表达,差异具有统计学意义(P<0.001,P<0.01);中药组与西药组比较,差异不明显。7、大鼠食管SCF、c-kit基因m RNA的表达:与假手术组比较,模型组大鼠食管下括约肌SCF和c-kit m RNA呈低水平表达,差异具有统计学意义(P<0.001,P<0.0001);与模型组比较,西药组和中药组SCF和c-kit m RNA的表达水平显著上调(P<0.05,P<0.01);中药组与西药组比较差异不明显。结论:1、丁香降气方通过增加血清中GAS、MTL浓度,减少NO、VIP的含量,纠正神经内分泌失衡状态,从而促进胃排空,增强食管下括约肌的抗反流屏障作用。2、丁香降气方可能通过上调食管组织内SCF、c-kit m RNA及蛋白的转录和表达水平,促进ICCs细胞超微结构的修复,从而起到增强食管下括约肌压力的作用。