急性白血病中HMGB1及相关血管内皮生长因子表达水平研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aska1982st
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目的:本文旨在研究急性白血病(Acute leukemia, AL)患者血清中高迁移率族蛋白B1(High mobility group box1protein, HMGB1)和相关血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF) VEGFA、VEGFC及其相关受体VEGFR1、 VEGFR2、 VEGFR3的表达水平,探索急性白血病进展的相关新因素,为补充新的治疗方法提供理论基础。方法:(1)收集2012年3月至10月大连医科大学附属二院血液科住院急性白血病患者血清71例,其中包括初发未治患者34例,完全缓解27例,复发难治10例。在71例中急性非淋巴细胞白血病(Acutenonlymphocytic leukemia,ANLL)患者为42例(M11例, M29例,M316例,M41例, M59例, M66例),其中初发未治患者20例,完全缓解18例,复发难治4例;急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblasticleukemia,ALL)患者为29例(L112例, L217例),其中初发未治患者14例,完全缓解者9例,复发难治6例。所有患者均经临床、外周血象、骨髓细胞形态学及细胞化学染色检查确诊,符合国内诊断及疗效标准,全部病例均除外合并心、肝、肾功能异常以及合并急慢性感染,除外合并其他恶性肿瘤和自身免疫性疾病,除外合并妊娠。在71例中男性37例,女性34例,年龄14-79岁,中位年龄46岁。正常对照30例,均为大医二院体检中心体检健康者,其中男性14例,女性16例,年龄16-75岁,中位年龄47岁。(2)所有血清均来自于待测者清晨空腹抽取静脉血3ml,放入含有枸橼酸钠的抗凝管中,室温静置2小时,1000r/min离心20分钟,取血清,约1ml,放入EP管中分装,-20℃保存待测。(3)双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)是利用抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的抗体与连接于固相载体上的抗体结合,然后加入生物素化的抗体,将未结合的生物素化抗体洗净后,加HPR标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗体呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。(4)本试验采用ELISA测定血清中HMGB1、VEGFA、VEGFC、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3含量。结果:1.通过测定各组AL血清中HMGB1的水平,发现初发未治组、复发难治组HMGB1水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),完全缓解组血清HMGB1含量较初发未治组明显下降,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),复发难治组血清HMGB1含量明显高于正常对照组和完全缓解组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ANLL组初发未治组HMGB1(517.17±477.49)pg/ml,完全缓解组HMGB1(88.66±75.74)pg/ml,复发难治组HMGB1(1016.25±978.49)pg/ml,ALL组初发未治组HMGB1(659.98±479.55)pg/ml,完全缓解组HMGB1(73.75±47.44)pg/ml,复发难治组HMGB1(677.00±354.10)pg/ml,正常对照组为(15.87±15.98)pg/ml。2.通过测定AL各组血清中VEGFA、VEGFC、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3的水平,发现在ANLL组中,初发未治组血清中VEGFA、VEGFR1、 VEGFR3水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),完全缓解组血清VEGFA、VEGFR1、VEGFR3含量较初发未治组明显下降,但与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);初发未治组和完全缓解组血清中VEGFR2水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P=0.05),初发未治组和完全缓解组比较差异无统计学意义(P>0.05);初发未治组、完全缓解组及正常对照组血清中VEGFC均不表达。在ANLL组中,VEGFA初发未治组为(559.60±542.92)pg/ml,完全缓解组为(21.24±21.47) pg/ml,正常对照组为(92.46±42.35)pg/ml;VEGFR1初发未治组为(0.30±0.09) ng/ml,完全缓解组为(0.15±0.11)ng/ml;正常对照组为(0.04±0.03) ng/ml;VEGFR2初发未治组为(1.53±0.34)ng/ml,完全缓解组为(1.30±0.10) ng/ml,正常对照组为(0.44±0.56) ng/ml;VEGFR3初发未治组为(13.05±4.21) ng/ml,完全缓解组为(3.13±1.71)ng/ml,正常对照组为(2.62±1.31) ng/ml。在ALL组中,初发未治组血清中VEGFR2、VEGFR3水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),完全缓解组血清VEGFR2、VEGFR3含量较初发未治组明显下降,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);初发未治组血清中VEGFA、VEGFR1水平与缓解期、正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05,P>0.05);初发未治组、完全缓解组及正常对照组血清中VEGFC均不表达。在ALL组中,VEGFA初发未治组为(473.27±469.87) pg/ml,完全缓解组为(74.96±50.62)pg/ml,正常对照组为(92.46±42.35) pg/ml; VEGFR1初发未治组为(0.29±0.19) ng/ml,完全缓解组为(0.06±0.03) ng/ml,正常对照组为(0.04±0.03) ng/ml; VEGFR2初发未治组为(1.49±0.32) ng/ml,完全缓解组为(0.04±0.03) ng/ml,正常对照组为(0.44±0.56) ng/ml;VEGFR3初发未治组为(13.68±6.99) ng/ml,完全缓解组为(5.37±2.40) ng/ml,正常对照组为(2.62±1.31) ng/ml。3.在ANLL中,初发未治组血清HMGB1分别与VEGFA、VEGFR1、VEGFR2、 VEGFR3做相关性分析,结果无相关,(r值分别为-0.400、-0.099、-0.053、0.089; P>0.05)。在ALL中,初发未治组血清HMGB1分别与VEGFA、VEGFR1、VEGFR2、 VEGFR3做相关性分析,结果无相关,(r值分别为-0.029、0.005、-0.67、0.179; P>0.05)。结论:HMGB1在急性白血病患者血清中表达水平异常升高,血清HMGB1含量在ANLL、 ALL初发未治组及复发难治组中增高,而在经治疗完全缓解后明显下降,其水平变化与病情进展程度相关,因此,HMGB1可能成为临床诊断急性白血病及判断治疗后病情转归的参考指标。VEGF及其受体在ANLL和ALL血清中存在异常表达,ANLL中,初发未治组患者血清的VEGFA、VEGFR1、VEGFR3表达水平明显高于缓解组和正常对照组。在ALL组中,初发未治组患者血清VEGFR2、VEGFR3的表达水平明显高于缓解组和正常对照组。在ALL组和ANLL组中VEGFC均不表达。可推测VEGF及其受体可用来监测急性白血病的发展,为判断急性白血病的预后提供更有价值的依据。在ANLL和ALL组中初发未治组血清HMGB1分别与VEGFA、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3做相关性分析,发现HMGB1与上述指标无相关性。
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