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异叶梁王茶和掌叶梁王茶为梁王茶属药用植物,异叶梁王茶[Metapanaxdavidii(Franch.)FrodinexJ.Wen&Frodin]的根、茎入药,能祛风除湿活络。掌叶梁王茶[M.delavayi(Franch.)FrodinexJ.Wen&Frodin]的茎、叶入药,有清热、消炎之效,主治喉炎,中医临床证实梁王茶对很多疾病有确切疗效。梁王茶原植物在我国西南地区分布较广,很有开发价值。
异叶梁王茶和掌叶梁王茶含有多种次生代谢产物,如皂甙、蒽醌类化合物、黄酮类化合物、生物碱等,它们都具有生理活性。异叶梁王茶和掌叶梁王茶含有一定比例的可溶性多糖,梁王茶多糖有显著的消炎、抗衰老等功效,而且具有双向免疫调节作用。梁王茶多糖分子量小,水溶性好,毒性低,是一种很有前景的多糖药物。但有关梁王茶多糖种类、结构和药理作用的研究不多,关于其结构及药理作用关系的报道更是鲜见,对梁王茶多糖的提取、分离、纯化方法尚未见报道。本文的主要研究目的是提取、分离、纯化梁王茶多糖,进而研究其多糖的组成,比较异叶梁王茶和掌叶梁王茶不同药用部位的多糖含量,研究分离所得的梁王茶多糖的抗氧化活性。
一、梁王茶多糖提取条件的研究用有机溶剂预处理异叶梁王茶可提高多糖的收率和纯度,用95%乙醇的除杂效果显著,不必再加极性更弱的有机溶剂。
影响梁王茶多糖提取的因素有提取时间、温度、用水量、提取次数。提取时间以提取液中多糖浓度达到基本稳定为度,用连续取样法确定。不同温度下所需提取时间不等,室温浸泡需40-50h,60℃浸泡耗时20h,煮沸提取仅需沸腾1.5h。提取温度、加水量和提取次数都影响梁王茶多糖收率,温度越高,收率越高。在常压下,从室温到沸腾,提取温度的升高会改变所得梁王茶多糖中不同分子量范围的组分浸出的比例。加水量为材料的80倍且分三次提取时,梁王茶多糖的收率在80%以上,再增加水量和提取次数,收率的增幅已经不大。60倍水分三次提取,多糖收率即达75%左右,而能耗大为降低,是一种较经济的选择。提取温度还影响粗多糖纯度,二者呈正相关。
二、分离及纯化方法的研究提取液中的杂蛋白的去除,用TCA法在沉降蛋白质的同时可除去大量色素,比用Sevag法和鞣酸法的效果好。多糖的脱盐用SephadexG-50比透析效果好,透析的时耗长,多糖损失大,且易受微生物污染,SephadexG-50脱盐无这些弱点。单糖、低聚糖、甙类等杂质可于醇析步骤除去。醇析时应调pH至10,方可沉淀完全。沉淀用80%乙醇洗涤几次,然后依次用90%乙醇、95%乙醇和无水乙醇脱水,60℃真空干燥,所得粗多糖疏松,颜色较浅。
用SephadexG-100柱层析可将梁王茶多糖分成两个组分,分别命名为MPS1和MPS2。
三、梁王茶多糖的理化性质用SephadexG-100柱层析测定各组分分子量,用薄层层析展开各组分的酸水解液,测得MPS1分子量为65.811kD,由葡萄糖、半乳糖和核糖组成;MPS2分子量为0.396kD,由葡萄糖和鼠李糖组成。MPS1和MPS2均不含有氨基酸或蛋白质。
四、梁王茶多糖的抗氧化作用MPS1和MPS2对OH和02都有一定的清除作用。其中MPS2的清除作用较强,且随着多糖浓度的增大,清除率相应升高。MPS1的清除作用较弱,并且随多糖浓度的变化不太明显。