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草莓(Fragaria ananassa Duch)属于蔷薇科草莓属多年生草本植物,是一种重要的经济浆果,在世界范围内广泛种植。然而草莓安全越冬和耐寒品种的缺乏成为生产上的突出问题。生物技术的飞速发展为解决这一问题提供了新的途径。水稻转录因子RdreB1BI是一个调控植物发育且与植物胁迫抗性相关的转录因子。已有研究证明将RdreB1BI基因转化拟南芥,拟南芥植株的抗早性和耐寒性有很大提高。到目前为止还未见有RdreB1BI基因转化草莓的研究。因此本试验目的是用根癌农杆菌介导的转化方法将水稻RdreB1BI基因导入草莓细胞,获得抗寒的转基因植株。主要研究结果有以下几点:1.以草莓‘丰香’、‘雪蜜’、‘鬼怒甘’的叶片和叶柄为外植体,建立了高效离体再生体系。‘丰香’叶片和叶柄的最佳不定芽再生培养基为:MS+TDZ(2.0mg/L)+IBA(0.2mg/L)+2,4-D(0.1mg/L)和MS+B5+TDZ(2.0mg/L)+IBA(0.2mg/L)+2,4-D(0.1mg/L)。‘雪蜜’叶片和叶柄的最佳不定芽再生培养基为:MS+TDZ(1.5mg/L)+IBA(0.2mg/L)和MS+B5+TDZ(2.0mg/L)+IBA(0.2mg/L)。‘鬼怒甘’叶片和叶柄的最佳不定芽再生培养基为:MS+BA(2.0mg/L)+IBA(0.1mg/L)和MS+BA(2.0mg/L)+IBA(0.1mg/L);‘丰香’、‘雪蜜’暗培养时间为14天,‘鬼怒甘’暗培养时间为7天;‘丰香’、‘鬼怒甘’叶片不定芽再生的最佳叶龄为10-30天,‘雪蜜’叶片不定芽再生的最佳叶龄为20天以下。三个草莓品种叶柄不定芽再生的最佳叶龄都是20天以下;叶片放置方式对三个草莓品种的叶片不定芽再生没有影响,叶柄刻伤向上放置有利于三个草莓品种叶柄不定芽再生。2.克隆了rd29A启动子,通过对比分析,与已公布的序列有98.72%的同源性,主要调控区域也一致。构建了两个植物表达载体pYH4215-rd29A和pYF7713-Rdre。3.通过研究影响遗传转化的因素,建立了农杆菌介导的‘雪蜜’草莓遗传转化体系:菌液浓度为OD600=0.4;侵染时间为9min;选用200mg/L的Cb作为抑菌抗生素,20mg/L的Kan作为筛选抗生素;共培养时间3天;共培养培养基:MS+TDZ(2.0mg/L)+IBA(0.2 mg/L);筛选培养基:MS+TDZ(2.0mg/L)+IBA(0.2mg/L)+Kan(20mg/L)+Cb(200mg/L);伸长培养基:MS+6-BA(0.5mg/L)+NAA(0.1mg/L)+Kan(20mg/L)+Cb(200mg/L);生根培养基:MS+IBA(0.1mg/L)+Kan(20mg/L)+Cb(200mg/L)。4.获得了Kan抗性的含有RdreB1BI基因的草莓转基因株系15株,PCR以及RT-PCR检测证明,有4个株系外源基因已经成功的导入和整合到草莓基因组中。脯氨酸含量的测定和低温处理表明,转基因的植株较非转基因植株抗寒性有所提高。