目的:局部麻醉药是临床广泛应用的麻醉药物,但是很多研究表明,大多数局部麻醉药都有潜在的神经毒性,主要表现为感觉和运动功能异常。凋亡是一种由基因控制的自主的细胞死亡方式,对维持内环境稳定和细胞的生长发育起重要作用,也参与许多病理过程。研究表明,局部麻醉药所致的神经并发症多与其神经毒性有关,而凋亡是神经毒性的主要病变基础。经典的细胞凋亡过程主要通过两种途径被激活,内源性途径(也称为线粒体途径)和外源性途径(也称为死亡受体途径)。既往研究表明,线粒体途径(内源性途径)参与了局部麻醉药所致的神经细胞凋亡的调控,然而,死亡受体途径是否参与其中目前尚不清楚。本课题将探讨Fas/FasL死亡受体途径是否参与了局部麻醉药所致的神经细胞凋亡,为进一步阐明局部麻醉药的神经毒性机制提供新的依据。方法:用不同浓度罗哌卡因处理体外培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞不同时间,建立局麻药神经毒性的体外培养模型,然后进行下列实验。(1)细胞活力(CCK-8法检测)。(2)细胞形态学改变(光学显微镜)。(3)细胞坏死(Hoechst 33342/PI染色)。(4)细胞凋亡率(Annexin V-FITC/PI染色)。(5)Fas,Fas L,caspase-3,caspase-8 mRNA表达变化(qPCR检测)。(6)Fas,FasL,cleaved caspase-3蛋白表达变化(免疫荧光、western blot检测)。结果:(1)罗哌卡因可降低PC12细胞活力,不同浓度和时间组之间两两比较有差异(P<0.05)。(2)罗哌卡因可引起PC12细胞变圆,突起回缩或消失。(3)罗哌卡因处理PC12细胞后坏死细胞增加,组间比较有差异(P<0.05)。(4)罗哌卡因处理PC12细胞后细胞凋亡率增加,组间比较有差异(P<0.05)。(5)罗哌卡因处理PC12细胞后Fas,FasL,caspase-3,caspase-8 mRNA表达增加,组间比较有差异(P<0.05)。(6)罗哌卡因处理PC12细胞后Fas,FasL,cleaved caspase-3蛋白表达增加,组间比较有差异(P<0.05)。结论:罗哌卡因对PC12细胞的损伤呈浓度和时间依赖性,其诱导PC12细胞凋亡的机制可能与Fas/FasL上调有关。