猪伪狂犬病（Porcine pseudorabies,PR）是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的重要传染病,不仅严重危害养殖业的发展,还对人类公共卫生安全造成重大威胁。疫苗免疫成为预防和控制该病的主要手段。自2011年以来,我国很多地区接种了 Bartha-K61疫苗的猪场仍爆发了 PR,这意味着现有的疫苗无法提供完全的免疫保护,养猪业面临巨大威胁。最新研究报道,PRV还能感染人并引起人的急性脑炎。因此,筛选能预防和/或治疗PRV感染的药物迫在眉睫。表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gallate,EGCG）是绿茶中一种生物活性多酚,现已在逆转录病毒科、正粘病毒科和黄病毒科等多种病毒家族中证实了其抗病毒活性,如人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）、甲型流感病毒（Influenza A virus,IAV）和丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）等。EGCG是否对PRV有抗病毒作用目前仍不清楚,EGCG在PRV病毒侵袭过程中的分子机制未有报道。本研究旨在探究EGCG对PRV的抗病毒作用及其分子机制。1.EGCG对PRV的抗病毒作用研究在本研究中,我们对EGCG在体外和体内抗PRV的活性进行研究。发现EGCG对PRV Ra和PRVXJ5毒株感染PK15 B6细胞和Vero细胞均具有显著的抑制作用,且呈剂量依赖性,50 μM EGCG可阻断较高感染复数（multiple of infection,MOI）PRV的感染。进一步试验发现EGCG以剂量依赖性的方式阻断了 PRV吸附和入胞,但EGCG对PRV吸附的抑制更显著。本研究还发现EGCG可抑制PRV在PK15 B6细胞上的复制。然而,EGCG不影响PRV的组装,可促进PRV的释放。此外,40 mg/kg的EGCG对感染致死剂量PRV XJ5的BALB/c小鼠提供了 100%的保护。以上结果表明,EGCG在体外主要通过抑制PRV的吸附、入胞和复制发挥其抗病毒活性。同时,EGCG提高了感染PRV小鼠的存活率。因此,EGCG是一种潜在的抗PRV感染的药物。2.EGCG抗PRV感染的分子机制研究细胞自噬和凋亡在病毒复制中起重要作用。本研究探究了 EGCG是否通过调控PRV诱导的自噬和凋亡来发挥抗病毒作用。研究发现PRV Ra和XJ5毒株均能诱导PK15细胞和PK15 B6细胞发生不完全自噬,并通过Caspase 3途径诱导细胞凋亡,而50 μM的EGCG可有效抑制PRV诱导的细胞自噬和凋亡。进一步研究发现,PK15以及PK15 B6细胞感染PRV后BNIP3蛋白表达量升高,过表达或敲低BNIP3蛋白后发现,BNIP3蛋白的过表达促进了 PRV诱导的不完全自噬以及Caspase 3介导的凋亡,同时促进了 PRV的复制。此外,研究发现PRV Ra和XJ5毒株感染PK15和PK15 B6细胞会导致JAK1活化,STAT1、STAT5以及STAT6蛋白的磷酸化水平显著增加,STAT3蛋白的磷酸化水平降低。JAK1的抑制剂Ruxolitinib可降低STAT1、STAT3、STAT5以及STAT6的磷酸化,抑制BNIP3的表达;同时,抑制了 PRV诱导的不完全自噬以及Caspase 3介导的细胞凋亡;此外,Ruxolitinib也抑制了 PRV的复制。在PK15细胞上分别敲低STAT1、STAT3、STAT5以及STAT6,发现敲低STAT1的细胞感染PRV促进了BNIP3蛋白的表达,促进了不完全自噬以及Caspase 3介导的细胞凋亡,同时促进了 PRV的复制;敲低STAT3、STAT5以及STAT6的细胞在感染PRV后,抑制了 BNIP3蛋白的表达,并抑制了细胞的不完全自噬以及Caspase 3介导的凋亡,同时抑制了病毒的复制。综上所述,STAT1负调控PRV诱导的细胞不完全自噬、Caspase 3介导的凋亡和病毒的复制,STAT3、STAT5以及STAT6正调控PRV诱导的细胞不完全自噬、Caspase 3介导的凋亡和病毒的复制。EGCG具有显著的抗PRV病毒活性。本研究发现EGCG抑制JAK1蛋白的表达,导致STAT5以及STAT6的磷酸化水平降低,并抑制了 BNIP3蛋白的表达,同时抑制了 PRV诱导的细胞不完全自噬以及Caspase 3介导的凋亡;但EGCG可促进STAT3的磷酸化,且STAT3正调控PRV的复制,表明EGCG不通过STAT3发挥抗病毒的作用。因此,EGCG通过JAK1/STAT5（STAT6）/BNIP3途径抑制PRV诱导的细胞不完全自噬和Caspase 3介导的凋亡,从而抑制了 PRV的复制。