目的：本实验室通过酵母双杂交技术发现，BART 与N型钙离子通道可能存在相互作用，进一步的体外共转染实验显示，BART和钙离子通道分子在海马神经元内有共定位现象。为进一步研究BART的功能及其与钙离子通道的相互作用及其机制，首先需要获得BART 抗体和钙离子通道抗体。 但是由于商品化的鸡抗BART 抗体的二抗为兔抗鸡，在进行BART和钙离子通道免疫双标时，可能与商品化的兔抗钙离子通道抗体存在交叉反应，所以我们采用在大肠杆菌系统中表达全长BART 分子作为免疫原，制备小鼠抗人BART的多克隆抗体，用以解决这一难题。 方法：1）采用pET-28a(+)表达载体，通过PCR 方法从人源cDNA库中扩增出全长BART 基因，构建成pET-28a(+)-BART 质粒，然后转化至BL21 大肠杆菌，并通过筛选、鉴定和测序验证；2）IPTG 诱导表达含6 个组氨酸（6xHIS）的BART 融合蛋白，采用变性的方法裂解细菌，通过镍树脂（Ni-NTA）亲和层析纯化系统得到纯化的BART 融合蛋白，并经Western-blot 验证；3）将纯化的融合蛋白与弗氏佐剂充分乳化后免疫BALA/c小鼠（6 ～8周），获得小鼠抗BART 多克隆抗体，通过Western-blot 验证该抗体的特异性；4）采用免疫组化方法，检测BART分子在海马神经元、星形胶质细胞中的表达格局以及BART 与钙离子通道在海马神经元和皮层神经元中的共定位。 结果：1）获得了人源性BART 基因工程菌克隆，该克隆可表达6xHIS-BART 融合蛋白；2）获得了纯化的6xHIS-BART 融合蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性；3）用BART 融合蛋白免疫BALA/c小鼠，获得了小鼠抗人BART 多克隆抗体，效价达1:10,000以上，该抗体能与大鼠脊髓匀浆中的BART 蛋白特异结合；4）免疫组化染色结果显示，BART 分子在海马神经元和星形胶质细胞中广泛表达；在海马神经元和皮层神经元中，BART 与钙离子通道存在共定位现象。 结论：经基因工程诱导表达的BART融合蛋白具有良好的免疫原性，将其作为抗原制备的小鼠抗BART 多克隆抗体能特异地识别天然BART 蛋白；采用该BART 多抗，通过免疫组化染色，显示了BART 分子在海马神经元、星形胶质细胞中的表达格局，以及BART 与钙离子通道在海马神经元和皮层神经元中存在共定位现象，表明本研究制备的小鼠抗BART多克隆抗体为进一步研究BART的功能打下了良好基础。