【摘 要】
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背景:宫颈癌恶性程度高,进展迅速,预后差,其发生受遗传和生活因素的影响。在全球范围内,每年约有288,000名女性死于宫颈癌,在中国每年约有135,000名新发病例,占全球的1/3。目前宫颈癌的治疗还是以放射疗法,化学疗法和外科手术疗法为主,但是整体费用高且治愈率低,给大多患者带来很大的经济压力和低质量的生活。因此我们迫切需要获得适应症新药,或者用于诊断和预后的标志物。目前,中医药作为中国传统医学
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背景:宫颈癌恶性程度高,进展迅速,预后差,其发生受遗传和生活因素的影响。在全球范围内,每年约有288,000名女性死于宫颈癌,在中国每年约有135,000名新发病例,占全球的1/3。目前宫颈癌的治疗还是以放射疗法,化学疗法和外科手术疗法为主,但是整体费用高且治愈率低,给大多患者带来很大的经济压力和低质量的生活。因此我们迫切需要获得适应症新药,或者用于诊断和预后的标志物。目前,中医药作为中国传统医学治疗肿瘤受到越来越多的关注,其在配合放、化疗的增效减毒,术后防止肿瘤转移复发和晚期肿瘤患者临床症状的改善,以及提高生存质量和延长生存期等方面皆有较成功的临床案例。肿节风（Sarcandrae Herba SH）是一味治疗风湿痹痛的药物,具有很高的药用价值,一直以来用于血热发疹、疮疡肿毒等。现代药理研究表明肿节风具有抗肿瘤和调节机体免疫的作用,目前被开发成多种剂型,比如草珊瑚含片,用以疏风清热,消肿止痛,清利咽喉;肿节风注射液,广泛用于临床辅助治疗宫颈癌、直肠癌和食管癌等效果显著。但是肿节风中的具体抗癌活性成分不明,涉及的靶点和信号通路未被深入研究,本项目基于这些问题展开研究,以期有新的发现。目的:运用网络药理学挖掘肿节风的抗宫颈癌活性成分,并借助生信工具探索该成分体外调控的信号通路和涉及的靶点,并通过实验验证分析正负性调节关系。方法:网络药理学实验:基于中药成分的复杂性和治疗多靶点的特性,结合网络药理学分析肿节风活性成分对宫颈癌细胞的体外作用。在数据库中搜索与肿节风相关的化学成分和信号靶点获得肿节风的信息;下载Uni Prot数据库的ID号并通过Perl代码转换整个文档,并评估药物与疾病之间的相关性;在疾病相关数据库中搜索相关术语“宫颈癌”以识别疾病相关基因,消除重复和假阳性基因后,将它们与抗宫颈癌潜在靶标相匹配以找到共同作用靶标;用STRING数据库预测蛋白质相互作用网络;将文件中的节点1、节点2和综合结合紧密度得分数据放入Cytoscape中以绘制交互网络图,根据统计工具的样式（Cytoscape→工具→网络分析器→分析→根据统计生成样式）控制节点大小和颜色设置以反映相互关联程度来确定hub基因。细胞实验:通过MTT,FACS,Western blotting,Ed U,Transwell,q RT-PCR和划痕实验等方法,体外研究肿节风活性成分对宫颈癌细胞的调控机制和涉及靶点之间的作用。结果:网络药理学实验:通过网络药理学结果分析证明槲皮素作为肿节风的有效成分之一,可能发挥了主要的抗肿瘤作用,获得的靶点网络作用图显示结节EGFR为hub基因（在基因表达网络中有较高的连接度）,表明EGFR在槲皮素诱导的体外抗宫颈癌活性中可能具有重要的生物学意义。细胞实验:结合MTT,FACS,Western blotting,Ed U,Transwell,q RT-PCR和划痕实验等方法验证,结果显示槲皮素可降低宫颈癌细胞的活力,导致细胞的G2/M期周期阻滞和细胞凋亡,并抑制细胞的迁移和侵袭。我们选择EGFR的Tyr-1068磷酸化位点和所对应的下游靶点ERK参与研究,发现这两种激酶明显被槲皮素激活。此外,EGFR的抑制剂Afatinib和ERK的抑制剂U0126都进一步诱导宫颈癌细胞活性降低、周期阻滞和凋亡增加。因此,我们的结果首次证明槲皮素激活EGFR和ERK可以抵抗槲皮素诱导的抗宫颈癌细胞活性。结论:本研究结合网络药理学分析,结果表明槲皮素是肿节风的活性成分之一,可能具有重要的研究价值,槲皮素可以显著抑制宫颈癌细胞的活力,促进G2/M期细胞周期阻滞和细胞凋亡,并抑制细胞迁移和侵袭。但是EGFR和ERK的抑制剂均能增强槲皮素诱导的体外抗肿瘤作用,表明EGFR和ERK的激活在槲皮素诱导的体外抗宫颈癌活性中起抵抗作用,同时也证明了阿法替尼（Afatinib）与槲皮素的协同抗宫颈癌作用。
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