【摘 要】
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目的:本论文对三果汤（Triphala,THL）组方余甘子、诃子、毛诃子及三果汤冻干粉中没食子酸、柯里拉京、鞣花酸进行含量测定;采用细胞及动物实验系统评价藏药三果汤通过调控胰岛旁分泌因子胰岛素（Insulin,INS）、胰高血糖素（Glucagon,GC）、生长抑素（Somatostatin,SST）的分泌,调节糖尿病状况下胰岛β细胞的功能,为防治糖尿病提供科学依据。方法:1.HPLC测定藏药三果
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目的:本论文对三果汤（Triphala,THL）组方余甘子、诃子、毛诃子及三果汤冻干粉中没食子酸、柯里拉京、鞣花酸进行含量测定;采用细胞及动物实验系统评价藏药三果汤通过调控胰岛旁分泌因子胰岛素（Insulin,INS）、胰高血糖素（Glucagon,GC）、生长抑素（Somatostatin,SST）的分泌,调节糖尿病状况下胰岛β细胞的功能,为防治糖尿病提供科学依据。方法:1.HPLC测定藏药三果汤中的组成药余甘子、诃子、毛诃子以及三果汤冻干粉中没食子酸、柯里拉京、鞣花酸的含量。2.采用不同糖浓度的培养基培养β、α细胞,诱导细胞高糖模型;三果汤含药血清联合培养细胞后,ELISA法检测βTC-6细胞上清液中INS、GABA、GLP-1及细胞中c AMP的水平,αTC1-6细胞上清液中GC及细胞中c AMP的水平,TC1-6+TC-6细胞上清液中GLP-1、GC、INS的水平;q RT-PCR法检测β、α、α+β细胞中INS、GC、PKA、CREB基因的表达。3.采用STZ腹腔注射大鼠复制糖尿病模型,成功后,将大鼠分为模型、三果汤（低、中、高）剂量及西格列汀阳性给药组,灌胃给药8周,记录大鼠体重、血糖;ELISA法检测大鼠外周血清INS、GC、SST等因子及胰腺组织中c AMP水平,免疫组化检测大鼠胰腺组织中INS、GC、SST,计算HOMA-β指数;Westrn blot法测定大鼠胰腺组织中IRα、GCGR、GLP-1R、GABRB2、SSTR5、PKA、p-PKA、CREB及Akt蛋白的表达,q RT-PCR法检测大鼠胰腺组织中INSR、GCGR、GLP-1R、SSTR5、GABAAR、PKA、CREB、Akt等基因表达。结果:1.HPLC对藏药三果汤质量标记物测定方法学考察良好,余甘子、诃子、毛诃子及三果汤冻干粉中的没食子酸含量分别为1.0661、1.1353、1.3273、6.2351 mg/g;柯里拉京含量分别为0.2926、3.496 6、0.3546、3.6007 mg/g;鞣花酸含量分别为0.1702、0.3180、0.1051、1.2313 mg/g,加样回收率、RSD值均符合要求。2.DMEM高糖培养基培养细胞48h,可诱导细胞高糖模型;ELISA结果显示,10%含药血清联合细胞培养24h后,与高糖组相比,β细胞上清液中INS、GLP-1水平有上升趋势,GABA水平升高（p<0.05）,细胞中c AMP水平升高（p<0.01）;α细胞上清液中GC水平降低（p<0.05）,细胞中c AMP水平降低（p<0.01）;β+α细胞上清液中INS水平有升高趋势,GC水平降低（p<0.05）,GLP-1水平升高（p<0.05）;q RT-PCR结果显示,与高糖组相比,2.5%、10%的三果汤含药血清与细胞联合培养24h后,β细胞中INS、PKA、CREB基因表达上调（p<0.05,p<0.01）;α细胞中GC、PKA、CREB基因表达下调（p<0.05）;β+α细胞中INS表达上调（p<0.01）,GC表达下调（p<0.01）,PKA、CREB有表达上调的趋势。3.三果汤可降低糖尿病大鼠血糖,使大鼠体重增加;ELISA结果显示,与模型组相比,三果汤给药组血清中INS、GLP-1、GIP、GABA、SST水平均升高（p<0.01）,胰腺组织中c AMP水平升高（p<0.01）;GC、5-HT水平降低（p<0.01）;HE染色显示给药组大鼠胰岛面积逐渐变大,其中三果汤高剂量组较明显;免疫组织化学结果显示,与模型组相比,给药组大鼠胰腺组织中INS分泌表达增加,GC、SST分泌表达减少;大鼠HOMA-β指数升高（p<0.01）;Western blot结果显示,与模型组相比,阳性药组、三果汤组大鼠胰腺组织中IRα、GABRB2、SSTR5、PKA、p-PKA、Akt等蛋白表达均上调（p<0.01）,GCGR蛋白表达有下调趋势。q RT-PCR结果显示,与模型组相比,西格列汀组、三果汤高剂量组中INSR、GLP-1R、GLP-1R、PKA、CREB、Akt等基因上调（p<0.01,p<0.05）,SSTR5表达有下调趋势,GCGR表达下调（p<0.01）,GABAAR基因表达无明显趋势。结论:藏药三果汤可通过胰岛旁分泌改善高糖状态下胰岛β细胞功能,其机制与胰岛旁分泌因子与其受体结合,从而增强c AMP/PKA/CREB信号通路有关。
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