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[目 的]登革热是由登革病毒(Dengue Virus,DV)感染引起的最广泛的蚊媒传播疾病,对世界卫生健康是一个重大威胁,因此目前迫切需要研发针对登革病毒的疫苗和抗病毒药物。抗体依赖性感染增强效应(Antibody-Dependent Enhancement,ADE)直接影响异型登革病毒中和抗体产生的有效性,登革病毒感染靶向单核细胞诱导其产生Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ),抑制病毒的复制。本实验采用来源于急性单核细胞性白血病患者的人外周血单核细胞THP-1细胞作为研究对象,建立登革病毒的抗体依赖性感染增强作用的体外模型,并探究在此过程中,登革病毒感染后所引起的细胞内固有免疫系统产生变化,探究DENV-ADE效应中,IFN-Ⅰ信号通路中差异表达的基因,进一步筛选出其中的关键信号分子并预测其可能的调控方式。[方 法]从临床感染患者血清分离并在C6/36细胞上连续传代后获得感染性滴度稳定的DENV-3。使用MEGA6.0软件对病毒溯源的基因序列进行分析,并通过BIO-EDIT对其与一些亲缘性较近的序列进行同源性及突变分析,使用SimPlot软件进行同源重组分析。倍比稀释抗登革Ⅱ型病毒(DENV-2)prM抗体,分别与不同MOI的DENV-3混合,感染THP-1细胞,通过检测细胞的总RNA和细胞上清中的病毒RNA病毒载量,探讨建立最佳登革病毒抗体依赖性感染增强效应体外模型的最佳条件,包括最佳抗体稀释度以及病毒感染MOI。随后以最佳条件建立DENV-ADE细胞模型,分别在病毒感染后2h、6h、12h、24h和48h收取对照组、病毒感染组(DENV)和抗体依赖感染增强组(DENV-ADE)细胞总RNA,使用IFN-Ⅰ响应信号通路PCR阵列芯片对这5个时间点的三个组的细胞总RNA进行检测,通过PCR Array数据分析网站在线分析其中差异表达的基因,使用Q-PCR与Western Blot对结果进行验证,并使用KEGG探索DENV-ADE效应中可能调控的IFN-Ⅰ响应信号通路及信号分子。[结 果]从2013年云南西双版纳的登革热患者血清中分离并初步鉴定出一株DENV-3,在C6/36细胞上连续传代得到一株稳定的病毒株,为下一步实验可用。序列分析该病毒株与同年在国内其它地区的流行株亲缘性较近,如YN01、HN/2013/22和MN1302,同源性分析均显示99%,碱基分析与氨基酸分析也显示突变性低,同源重组分析显示该病毒株一致性较高,没有重组信号。通过不同抗体稀释度与病毒不同MOI摸索建模条件,发现不同病毒MOI处理都可以观察到细胞的登革病毒ADE效应,并从细胞内外的病毒拷贝数变化可知当抗体稀释度为1/256时,可得到最佳病毒增强效应。通过抗体稀释度为1/256时与病毒在THP-1细胞上作用后不同时间后的IFN-I响应信号通路PCR阵列芯片检测后发现7个基因的表达出现明显变化,经过Q-PCR与Western Blot验证后基因IL6未检出,5个基因的表达结果与芯片结果一致:2小时,DENV组的基因NOS2表达增加,DENV-ADE组表达降低,两组形成相反的趋势;6小时,DENV组的基因IFNB1和IFI27都表达降低,DENV-ADE组稍有减弱降低的趋势;12小时,DENV组的基因MET表达降低,DENV-ADE也降低;24小时,DENV组的基因IFNB1表达降低,DENV-ADE降低趋势增强;48小时,DENV组基因的IFNA2表达降低,DENV-ADE也是降低的。[结 论]分离传代获得一株稳定的DENV-3;利用prM抗体及DENV-3在THP-1细胞上建立ADE体外模型;病毒感染MOI=0.3,及抗体稀释度为1/256时,为本研究中增强病毒复制增殖的最佳条件;经过DENV及DENV-ADE作用THP-1细胞后,细胞中的IFN-Ⅰ相关基因出现了表达增强与减弱的不同变化,其中大部分基因的表达表现出下降的趋势,如IFNB1、IFI27、MET、IFNA2。且基因在不同时间点表达变化不相同,如NOS2在2h表达出现变化,但在之后无差异,说明IFN-Ⅰ的相关基因的确在登革Ⅲ型病毒抗体依赖性感染增强效应中起着一定的作用,并且有早期与晚期的差别,上述研究结果表明对IFN-Ⅰ信号通路部分关键信号分子是DENV-ADE发生的主要机制之一。