本研究以次郎柿组培苗叶片为试验材料,首次对根癌农杆菌EHA101介导的ACS与ACO反义联合基因转化次郎柿进行研究。主要内容包括①研究了选择抗生素壮观霉素和抑菌剂头孢霉素对叶片直接分化不定芽的影响。②建立了以次郎柿叶片为转化受体的根癌农杆菌遗传转化体系,详细探讨了预培养时间、共培养时间、筛选培养时间、侵染菌液浓度、AS浓度等因素对于转化效率的影响,并优化了转化条件。③采用根癌农杆菌介导法,进行了ACC合成酶和ACC氧化酶反义联合基因转化次郎柿的研究。④对筛选得到的抗性植株叶片进行了PCR检测。⑤研究了次郎柿嫁接条件。主要研究结果如下:1.叶片外植体对壮观霉素非常敏感,在分化培养基中附加30mg/L的壮观霉素即可完全抑制不定芽的分化;头孢霉素对叶片外植体的分化没有严重影响,300mg/L头孢霉素就能较好的抑制农杆菌的生长,且不定芽诱导率可达到72.4%。2.选择预培养4d的叶片,用菌液OD600值为0.6的菌液侵染10min,侵染时加入200 mg/L的乙酰丁香酮,转到DKW(1/2N)+ ZT 1.0 mg/L+ TDZ 0.5 mg/L+Cef 300 mg/L的培养基上共培养3d,再通过延迟筛选3d,可获得较好的转化效果,叶片分化率最高可达66 %。3.通过建立的遗传转化体系,获得抗性苗320株,其中38株经PCR检测呈阳性。4.嫁接时采用用磨尖的镊子在留有3~5片叶片的砧木上面戳一个深约3~5mm的孔,然后把下端表皮刮出伤口的接穗插入砧木上的孔里面,接穗大小为6mm左右时成活率最高。