丁香油口服液的研制及对人工感染鸡沙门氏菌病的治疗作用研究

来源 :吉林大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zhaoliping1984
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沙门氏菌是世界范围内普遍流行的人兽共患病原菌,严重危及人类公共卫生安全及动物健康。沙门氏菌感染导致的鸡白痢持续危害养鸡业的健康发展,造成的年度经济损失约数百亿美元。治疗沙门氏菌感染首选抗生素,但随着细菌耐药性的产生、传播和流行,导致现有抗生素的疗效显著下降。因此,为防控沙门氏菌感染,迫切需要开发新型药物或抗感染策略。沙门氏菌的基因组携带两套不同的毒力岛(SPI),其中SPI-1编码的T3SS协助沙门氏菌入侵宿主细胞;SPI-2编码的T3SS主要参与沙门氏菌的胞内存活、复制和增殖。因此,以T3SS为靶标进行药物筛选和研发是对抗沙门氏菌感染的理想策略。本研究以沙门氏菌T3SS为靶标进行抑制剂筛选,发现丁香酚能够有效抑制T3SS的功能且无抗菌活性,在体内外均可显著降低沙门氏菌的致病力。本研究以成药性良好的丁香油作为原料研发丁香油口服液。首先,通过辅料筛选和处方工艺考察,确定处方组成为:丁香油为主成分,PEG 400为主溶剂(溶媒),聚山梨酯80为助溶剂,枸橼酸为p H调节剂,BHT为抗氧化剂,乙醇为共溶剂。通过配制和稀释后稳定性研究,发现丁香油口服液的制备工艺良好。通过对三批不同中试产品的加速稳定性和长期稳定性研究,发现除有效成分含量有一定程度的下降外,其余各项检测指标均符合规定。通过效应蛋白-β-内酰胺酶融合报告系统,结合RT-PCR和蛋白免疫印迹实验,初步探究丁香油口服液抑制沙门氏菌T3SS功能的作用机制,发现丁香油口服液通过抑制沙门氏菌效应蛋白和调控蛋白基因转录,下调效应蛋白(Sip A和Sip B)和调控蛋白(Hil A),从而发挥抑制沙门氏菌T3SS功能的作用。通过丁香油口服液对人工感染鸡沙门氏菌病治疗试验,结果发现丁香油口服液具有良好的治疗效果。将丁香油口服液分别按推荐剂量、3倍推荐剂量和5倍推荐剂量连用15天,通过一般临床症状、血常规、血液生化、眼观病变和组织病理学指标评价丁香油口服液对鸡的安全性,发现丁香油口服液在有效剂量范围内对靶动物鸡安全性良好。综上所述,本研究成功制备出主成分为丁香酚,疗效确实、机制明确和安全性良好的丁香油口服液,为防治沙门氏菌感染药物研发提供新型策略,也为新兽药的临床应用奠定基础。
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