【摘 要】
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生物酶因其具有反应条件温和、催化效率高以及环境友好等特性,从而在不同行业中发挥着重要作用。现阶段生物酶的应用往往是一次性的,不能回收利用,且稳定性差,存储条件较为苛刻。生物酶的固定化为解决上述问题提供了一个行之有效的方案。磁性纳米颗粒和酶-无机杂化纳米复合物是酶固定化的优良载体。磁性纳米颗粒比表面积大,对酶的负载率高,且能借助外部磁场实现生物酶与反应介质的便捷分离,但难以同时实现酶的反复使用和酶活
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生物酶因其具有反应条件温和、催化效率高以及环境友好等特性,从而在不同行业中发挥着重要作用。现阶段生物酶的应用往往是一次性的,不能回收利用,且稳定性差,存储条件较为苛刻。生物酶的固定化为解决上述问题提供了一个行之有效的方案。磁性纳米颗粒和酶-无机杂化纳米复合物是酶固定化的优良载体。磁性纳米颗粒比表面积大,对酶的负载率高,且能借助外部磁场实现生物酶与反应介质的便捷分离,但难以同时实现酶的反复使用和酶活性的保持;酶-无机杂化纳米复合物通常能保持酶活,但存在负载效率低、分离回收难、机械强度低等缺陷。为了将两种材料的优势同时显现出来,我们制备了酶-无机杂化磁性纳米复合物,并使用不同的酶分别研究了其在生物催化和生物传感中的作用:(1)生物催化:我们选用β-半乳糖苷酶作为有机组分,Ca2+作为无机组分,通过共沉淀法制备了β-半乳糖苷酶-Ca2+杂化磁性纳米复合物,使用高分辨扫描电子显微镜可观察到珊瑚状的结构。该纳米复合物保留了β-半乳糖苷酶的绝大部分活性,能够有效地催化牛乳中乳糖的水解。除此之外,该磁性纳米复合物还具有良好的重复使用性和贮藏稳定性,五次循环使用后仍能保持所有的初始酶活性,经过20天室温贮藏后仍保留超过一半的初始酶活性。所以该磁性纳米复合物适用于食品工业中无乳糖牛乳的连续生产。(2)生物传感:我们选用胆碱氧化酶和辣根过氧化酶作为有机组分,Cu2+作为无机组分,通过共沉淀法制备了胆碱氧化酶-辣根过氧化物酶-Cu2+杂化磁性纳米花,并基于级联反应,构建了检测胆碱的比色传感器。样品中胆碱的浓度越高,催化生成的过氧化氢越多,从而催化更多的无色底物氧化为蓝绿色产物。该蓝绿色产物在418 nm处有一个紫外-可见吸收峰。通过测定418 nm处的吸收值,可实现对胆碱的定量检测。此外,还可以通过肉眼观察上清液的颜色变化对胆碱进行可视化分析。该方法的检出限为0.42μM。经洗涤后,该材料还能够重复使用,并且具有较高的贮藏稳定性,五次循环后检测的ΔA418 nm值为初始值的一半左右,贮藏15天后检测的ΔA418 nm值为初始值的一半左右,有着广阔的应用前景。
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