背景：　　血管性痴呆（Vascular dementia，VD）是指由于脑组织慢性缺血、缺氧引起的认知功能障碍综合征。海马区神经元损伤导致的空间学习记忆能力下降是本病发生的基础。国内外临床研究表明，针刺可改善VD患者的认知功能，提高患者的生活质量。针刺作为一种复杂的干预手段，不同参数的选择会对其临床疗效产生影响。本课题组前期研究发现，针刺可显著改善VD大鼠的空间学习记忆能力，其疗效与穴位的选择和配伍密切相关。在此基础上，本研究拟进一步探讨临床最常见针刺参数，包括行针、留针、频次、介入时间对针刺改善VD大鼠认知功能和海马神经元损伤的影响，为针刺防治VD的参数选择提供优化方案。　　目的：　　以双侧颈总动脉永久性结扎（2-vascular occlusion，2VO）诱导的VD大鼠为研究对象，采用 Morris 水迷宫、尼氏染色探讨行针与否、留针与否、针刺频次、介入时间对针刺改善VD大鼠认知功能及海马神经元损伤的影响。　　方法：　　1. VD模型的制备：采用2VO的方法建立VD模型　　用2％戊巴比妥钠0.2ml/100g腹腔麻醉。待大鼠疼痛刺激反应消失后，将其颈正中线的皮肤切开并分离双侧颈总动脉，采用5-0丝线将双侧颈总动脉永久性结扎。　　2. 动物分组及针刺方法　　2.1.行针与否：实验动物随机分为假手术组、模型组、行针组与不行针组。模型组、行针组与不行针组行 2VO术制备 VD模型，假手术组仅暴露双侧颈总动脉，不结扎。行针组与不行针组取“百会”穴及双侧“足三里”穴进行针刺。行针组施加捻转手法30s （角度＜90°，频率＞120次/min），每5min行针1次，并留针10min；不行针组不施加捻转手法，仅留针10min。以上治疗每天 1 次，持续 2 周，共 12 次（每6天休息1天）。　　2.2.留针与否：实验动物随机分为留针组与不留针组。留针组与不留针组行2VO术制备VD模型。留针组与不留针组均取“百会”穴及双侧“足三里”穴进行针刺，施加捻转补法30s（角度＜90 °，频率＞120次/min），每5min行针1次。留针组留针10min；不留针组不留针。以上治疗每天 1 次，持续 2 周，共 12 次（每6天休息1天）。　　2.3.针刺频次：实验动物随机分为每天针刺组与隔天针刺组，并行2VO术制备VD模型。每天针刺组与隔天针刺组取“百会”穴及双侧“足三里”穴进行针刺，施加捻转补法30s（角度＜90 °，频率＞120次/min），每5min行针1次，并留针10min，每天针刺组每天给予针刺治疗，隔天针刺组隔天给予针刺治疗，以上治疗均持续 2 周，每天针刺组共 12 次，隔天针刺组共6次（每6天休息1天）。　　2.4.针刺介入时间：实验动物随机分为D1组与D3组，并行2VO术制备VD模型。D1组与D3组取“百会”穴及双侧“足三里”穴进行针刺，施加捻转补法30s（角度＜90 °，频率＞120次/min），每5min行针1次，并留针10min；D1组造模后第1天开始针刺， D3组造模后第3天开始针刺。以上治疗每天 1 次，持续 2 周，共 12 次（每6天休息1天）。　　3. 行为学评价：采用Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习和记忆能力。　　4. 病理学评价：采用尼氏染色检测各组大鼠海马神经元损伤情况。　　5. 统计学分析：所有数据都以均数±标准误（x±SEM）表示。Morris 水迷宫采用重复测量资料的方差分析；其余数据采用单因素方差分析；P＜0.05为差异有显著性。　　结果：　　1. 行针与否对针刺改善VD大鼠空间学习记忆能力和海马神经元损伤的影响。　　与假手术组相比，模型组朝向角显著增大、逃避潜伏期显著延长；与模型组相比，行针组、不行针组的朝向角均显著减小、逃避潜伏期均显著缩短；与不行针组相比，行针组朝向角更小、逃避潜伏期更短。与假手术组相比，模型组大鼠平台所在象限停留时间缩短；与模型组相比，行针组与不行针组大鼠平台所在象限停留时间延长；与不行针组相比，行针组大鼠平台所在象限停留时间更长。　　假手术组大鼠海马尼氏细胞数量多，神经元细胞核大而圆。与假手术组比较，模型组大鼠海马尼氏细胞数量显著减少，神经元受损严重，失去正常结构，皱缩且排列散乱。与模型组相比，行针组与不行针组大鼠海马尼氏细胞数量显著增多，神经元排列尚整齐，但细胞间隙增宽，细胞带较薄，少量神经元可见尼氏体碎裂、胞质中央尼氏小体消失。与不行针组比较，行针组大鼠海马尼氏细胞数更多，神经元排列更为整齐、紧凑。　　综上所述，在其他参数不变的情况下，与不行针相比行针改善VD大鼠的认知功能和海马神经元损伤的疗效更好，故此后的治疗方案均采用行针手法。2. 留针与否对针刺改善VD大鼠空间学习记忆能力和海马神经元损伤的影响。　　与模型组相比，留针组、不留针组的朝向角均显著减小、逃避潜伏期均显著缩短；与不留针组相比，留针组朝向角更小、逃避潜伏期更短。与模型组相比，留针组与不留针组大鼠平台所在象限停留时间延长；与不留针组相比，留针组大鼠平台所在象限停留时间更长。　　与模型组相比，留针组与不留针组大鼠海马尼氏细胞数量显著增多，神经元排列尚整齐，但细胞间隙增宽，细胞带较薄，少量神经元可见尼氏体碎裂、胞质中央尼氏小体消失。与不留针组相比，留针组大鼠海马尼氏细胞数增多，神经元更为整齐、紧凑。　　综上所述，在其他参数不变的情况下，与不留针相比留针改善VD大鼠的认知功能和海马神经元损伤的疗效更好，故此后的治疗方案均采用行针配合留针进行治疗。　　3. 针刺频次对其改善VD大鼠空间学习记忆能力和海马神经元损伤的影响。　　与模型组相比，每天针刺、隔天针刺的朝向角均显著减小、逃避潜伏期均显著缩短；与隔天针刺相比，每天针刺朝向角更小、逃避潜伏期更短。与模型组相比，每天针刺与隔天针刺大鼠平台所在象限停留时间延长；与隔天针刺相比，每天针刺大鼠平台所在象限停留时间更长。　　与模型组相比，每天针刺与隔天针刺大鼠海马尼氏细胞数量显著增多，神经元排列尚整齐，但细胞间隙增宽，细胞带较薄，少量神经元可见尼氏体碎裂、胞质中央尼氏小体消失。与隔天针刺相比，每天针刺大鼠海马尼氏细胞数较多，神经元排列更为整齐、紧凑。　　综上所述，在其他参数不变的情况下，与隔天针刺相比每天针刺改善VD大鼠的认知功能和海马神经元损伤的疗效更好，故此后的治疗方案均采用行针、留针配合每天针刺。　　4. 介入时间对针刺改善VD大鼠空间学习记忆能力和海马神经元损伤的影响。　　与模型组相比，D1组、D3组的朝向角均减小、逃避潜伏期均缩短；两个针刺组的朝向角、逃避潜伏期差异不明显。与假手术组相比，模型组大鼠平台所在象限停留时间缩短；与模型组相比，D1组与D3组大鼠平台所在象限停留时间均延长；两个针刺组大鼠平台所在象限停留时间无显著差异。　　与模型组相比，D1组与D3组大鼠海马尼氏细胞数量显著增多，神经元排列尚整齐，但细胞间隙增宽，细胞带较薄，少量神经元可见尼氏体碎裂、胞质中央尼氏小体消失。D1组与D3组相比差异不明显。　　综上所述，在其他参数不变的情况下，2VO术后第1天或第3天开始针刺对改善VD大鼠的认知功能和海马神经元损伤的影响较小。　　结论：　　行针、留针、频次明显影响针刺对VD大鼠空间学习记忆能力和海马神经元损伤的改善作用，但介入时间对针刺治疗VD疗效的影响不明显。在2VO术后第1天或第3天开始采取行针、留针并每天针刺是治疗VD的最佳方案。