磁性二氧化硅载体的制备及其在固定化漆酶中的应用

来源 :中国科学院过程工程研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhoubin506
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磁性SiO2载体由于其具有均一的磁性能、良好的生物兼容性,同时其表面容易化学修饰等优点,在细胞分离、免疫检测、蛋白质提纯、固定化酶、靶向给药等生物分离和生物医学工程领域中展现出诱人的应用前景。Fe3O4由于其良好的氧化稳定性和生物兼容性,常被用来选作磁性载体中的磁性微粒。但是纳米尺度的Fe3O4由于具有高比表面积、高比表面能,以及粒子各向异性的偶极矩作用很容易产生团聚而导致粒子发生聚集和沉淀,不能形成稳定的分散体系,从而影响了磁性SiO2载体的制备。针对这一问题,本文开展了Fe3O4纳米颗粒的制备研究,并在此基础上进行了磁性SiO2载体的制备以及固定化漆酶应用方面的研究工作。主要取得了以下几个方面的研究结果:   首先在共沉淀法制备Fe3O4过程中加入油酸,制备出了亲油性的Fe3O4,通过非离子表面活性剂嵌段共聚物L64使其在水溶液中形成球状聚集体,这样亲油性的Fe3O4能够很好地分散在水相。然后用溶胶-凝胶法制备出磁性SiO2载体,制备的磁性SiO2载体具有较高的磁载量。   其次在共沉淀法制备Fe3O4过程中加入柠檬酸钠和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB),柠檬酸盐能够在Fe3O4成核的过程中吸附在其表面,可以有效地阻止Fe3O4的团聚,同时其表面的羧酸根离子所带的负电荷能与CTAB产生静电作用,能够通过位阻作用进一步阻止了Fe3O4的团聚,形成了水基磁流体。然后用溶胶-凝胶法制备出分散性较好的磁性SiO2载体。   最后用氨基修饰的磁性SiO2为载体,通过交联剂戊二醛固定化漆酶。研究了交联剂浓度、固定化时间、缓冲液pH值、给酶量等因素对固定化漆酶活力的影响,确定了载体固定化漆酶的最佳操作条件,同时还比较了固定化酶和游离酶的Km值、最适pH值和温度、热稳定性、操作稳定性等酶学性质。
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