谷胱甘肽在蛋白质和DNA合成及氨基酸运输过程中均发挥着重要作用,且具有抗氧化、重金属解毒以及增强免疫力等保健功能。最新医学研究表明:谷胱甘肽在治疗肝脏、癌症、艾滋病等疾病中能起到一定效果。生产谷胱甘肽的方法主要有:化学合成法、酶法和发酵法,其中发酵法经过不断改进生产工艺及菌种,已成为主要的工业生产方式。本论文研究了一种新的提高谷胱甘肽产量的方法,即将谷胱甘肽前体物质(半胱氨酸)合成的另一种途径导入酵母中,成功得到谷胱甘肽产量比出发菌株更高的工程菌。主要结果如下:1.从大肠杆菌中分别克隆出半胱氨酸和谷胱甘肽合成的关键酶基因(cysE和gshⅠ),cysE基因在143bp和196bp处与Genbank报道的序列不一致,其中196bp的差异导致编码的氨基酸发生改变;gsh Ⅰ基因在1343bp处与Genbank报道的序列不一致,编码的氨基酸也发生变化。2.通过快速定点突变方法改造克隆出的基因,获得了与Genbank报道的序列一致的目的基因;构建了含有cysE和gshⅠ双基因的酵母表达载体;该重组载体遗传转化酿酒酵母,经PCR验证,成功获得含有目的基因的酵母工程菌;工程菌发酵31h时的谷胱甘肽产量达到最高(1.315mg/ml),而出发菌需要发酵54h才达到最高值;而且工程菌的最高产量比出发菌株还相对提高1 5.1%。3.研究了酵母的不同破壁方法对谷胱甘肽产量的影响:超声波细胞破碎法的谷胱甘肽产量最高,为1.63mg/ml,化学破壁法为0.78mg/ml,煮沸及低温破壁法为0.62mg/ml,超声波细胞破碎法分别为后两种方法的2.1倍和2.6倍。