利用冷冻精液进行人工授精,使精液使用更加方便,可以不受时间、地域的限制,便于开展省际、国际间品种交流协作,提高优良种公畜的利用率;并可延长种公畜遗传资源的使用期限,在保障精液供应、血统更新、引种,降低生产成本等方而均具有重要意义。冷冻精液可以在后裔测定或疾病检测后再开始大量供应,可为稳定的遗传进展和严格的生物安全提供保障。目前,猪冷冻精液的应用仍远远低于牛冷冻精液应用的水平,主要是由于猪精液冷冻后质量严重下降、猪冻精输精方法尚不完善。本研究在实验室业已经建立的猪精液冷冻-解冻程序基础上,进一步完善程序,使冻精解冻后的质量得到提高;侧重从猪冷冻精液解冻后的存活时间、深部输精方案的优化等方面入手,旨在建立起一套实用化的猪冷冻精液人工输精技术体系,以期为加速猪冷冻精液在生产中的应用奠定基础。本研究包括如下内容。1.用0.25 mL细管冷冻保存猪精液的研究本试验旨在建立优化的猪精液冷冻保存方法。实验表明,采用ZO液对猪精液进行预稀释,室温平衡1h,加入冷冻Ⅰ液后于5℃水浴平衡1.5h,再加入冷冻Ⅱ液平衡2h后装入0.25 mL细管,液氮面上3 cm处平衡10 min投入液氮,采用37℃水浴解冻30s,可获得最佳冷冻效果。解冻后的精子活力平均为0.58±0.03,质膜完整率为63.2±1.2%,顶体完整率为51.4±2.6%;精子畸形率最低,仅为14±3.0%。2.猪冻精解冻后不同保存时间精子活力的比较本实验侧重研究了温度、添加卵黄、添加精浆、添加抗氧化剂和能量物质ATP以及混合添加卵黄和精浆对猪冷冻精液解冻后4h精子活力的影响.把解冻后的猪精液按照检查时间分组,分别记为0、1、1.5、2、3和4h,比较不同时间的精子活力。结果表明,温度、精浆和卵黄是影响存活时间的关键因素。解冻后精子的初始活力为0.60,放置1h后,室温(22～25℃)条件下精子活力明显高于37℃放置的精子活力(0.45对0.10):室温放置4h时,添加40%精浆+20%卵黄组精子活力优于40%精浆和20%卵黄单独添加组(0.52对0.45和0.10)。由此可见,在解冻液中添加40%精浆+20%卵黄、在室温条件下放置,可大大提高解冻后精子的存活时间;为猪冻精的实用化奠定了基础。3.采用高密度小体积猪冷冻精液进行深部输精的研究本实验采用猪冷冻精液(冷冻密度1×10~9个/mL),解冻后稀释于添加40%精浆或者不含精浆的ZO液中进行人工输精。采用子宫体内输精法,输精次数为1次或2次,输精剂量为5×10~8个精子/次,输精体积5 mL结果表明,在ZO液中添加精浆组可获得33.3%(6/18)的妊娠率,而不添加精浆组未获得妊娠(0/2)。表明在ZO液中添加精浆可能有助于提高妊娠率。此外,采用2次输精所获妊娠率为50%(4/8),优于1次输精的妊娠率20%(2/10)。试验初步表明,采用高密度小体积冷冻精液对猪进行深部输精具有一定的可行性,但仍需作进一步改进。