论文部分内容阅读
中国是世界第一大水果柑橘的生产大国,柑橘成熟期集中且难以长时间储藏,在贮运过程中保鲜方式不当,易发生霉变、腐烂降低品质。柑橘采后主要的病害包括青霉病(Blue mold)和酸腐病(Sour rot)等,目前控制这两种病害以化学杀菌剂方法效果最好。但是化学杀菌剂存在易残留,损害人体身心健康和污染环境等问题,且长期广泛使用易引起病原菌产生耐药性,因此亟需开发一些安全高效的保鲜剂产品和保鲜技术,以减少化学杀菌剂的大量使用。
ε-聚赖氨酸(ε-polylysine,ε-PL)是一种高安全性、可生物降解的天然食品防腐剂,对环境和人体健康无毒性。本论文采用组织分离法从有典型青霉病、酸腐病的沙糖橘果实上分离纯化出致病真菌,经分子生物学等方法分别鉴定为意大利青霉(Penicillium italicum)、柑橘酸腐菌(Geotrichum candidum var. citri-aurantii)通过ε-PL对意大利青霉和柑橘酸腐菌的离体和活体抑菌试验,研究探讨ε-PL对意大利青霉和柑橘酸腐菌的抑菌活性,并进一步探究了ε-PL对意大利青霉、柑橘酸腐菌的抑菌作用机制。主要研究结果如下:
1.从自然发病的沙糖橘果实表面分离得到2株致病真菌,经形态学鉴定、致病性检测以及rDNA-ITS序列分析将2株病原真菌分别鉴定为意大利青霉(Penicillium italicum)、柑橘酸腐菌(Geotrichum candidum var. citri-aurantii)。
2.ε-PL对意大利青霉的最小抑菌浓度(MIC)为200mg/L,ε-PL对意大利青霉菌丝生长和孢子萌发抑制的半最大效应浓度(EC50)分别为142.35mg/L和167.55mg/L。400mg/L的ε-PL的对意大利青霉菌丝生长和孢子萌发抑制率为(87.55±0.19)%和(86.88±0.61)%。浓度为1200、2400、4800mg/L的ε-PL处理可显著降低柑橘果实酸腐病的损伤接种发病率和病斑直径(P<0.05)。
3.ε-PL对柑橘酸腐菌的最小抑菌浓度(MIC)为400mg/L,ε-PL对柑橘酸腐菌菌丝生长和孢子萌发抑制的半最大效应浓度(EC50)分别为128.79mg/L和214.77mg/L。800mg/L的ε-PL的对柑橘酸腐菌菌丝生长和孢子萌发抑制率为(99.88±0.20)%和(99.32±0.59)%浓度为1600、4800、6400mg/L的ε-PL处理可显著降低柑橘果实酸腐病的损伤接种发病率和病斑直径(P<0.05)。
4.分别经浓度为MIC和2MIC的ε-PL处理后的意大利青霉、柑橘酸腐菌胞外相对电导率,OD260值上升,表明经ε-PL处理后意大利青霉、柑橘酸腐菌的细胞膜通透性增加,核酸等胞内物质外渗流出,PI染色试验后,经MIC和2MIC的ε-PL处理后的意大利青霉、柑橘酸腐菌红色荧光信号明显高于对照组,表明ε-PL处理能够破坏意大利青霉、柑橘酸腐菌细胞膜的完整性。
5.扫描电镜观察结果发现,ε-PL处理可改变意大利青霉、柑橘酸腐菌的菌丝体形态。经ε-PL处理后意大利青霉菌丝体由粗壮、均匀,形状规则变成干瘪、褶皱不规则的状态。经ε-PL处理可使柑橘酸腐菌菌丝体由表面光滑、结构完整,隔膜明显状态转变为表面严重褶皱、膨大凸起,整体扭曲变形,菌丝断裂状态。
6.ε-PL具有抑菌作用,其可能是通过破坏意大利青霉、柑橘酸腐菌的细胞膜结构而导致菌体细胞内容物外渗,进而影响细胞的生长代谢,使菌丝体形态结构畸变与孢子萌发受阻,进而抑制了菌体细胞的生长繁殖。
ε-聚赖氨酸(ε-polylysine,ε-PL)是一种高安全性、可生物降解的天然食品防腐剂,对环境和人体健康无毒性。本论文采用组织分离法从有典型青霉病、酸腐病的沙糖橘果实上分离纯化出致病真菌,经分子生物学等方法分别鉴定为意大利青霉(Penicillium italicum)、柑橘酸腐菌(Geotrichum candidum var. citri-aurantii)通过ε-PL对意大利青霉和柑橘酸腐菌的离体和活体抑菌试验,研究探讨ε-PL对意大利青霉和柑橘酸腐菌的抑菌活性,并进一步探究了ε-PL对意大利青霉、柑橘酸腐菌的抑菌作用机制。主要研究结果如下:
1.从自然发病的沙糖橘果实表面分离得到2株致病真菌,经形态学鉴定、致病性检测以及rDNA-ITS序列分析将2株病原真菌分别鉴定为意大利青霉(Penicillium italicum)、柑橘酸腐菌(Geotrichum candidum var. citri-aurantii)。
2.ε-PL对意大利青霉的最小抑菌浓度(MIC)为200mg/L,ε-PL对意大利青霉菌丝生长和孢子萌发抑制的半最大效应浓度(EC50)分别为142.35mg/L和167.55mg/L。400mg/L的ε-PL的对意大利青霉菌丝生长和孢子萌发抑制率为(87.55±0.19)%和(86.88±0.61)%。浓度为1200、2400、4800mg/L的ε-PL处理可显著降低柑橘果实酸腐病的损伤接种发病率和病斑直径(P<0.05)。
3.ε-PL对柑橘酸腐菌的最小抑菌浓度(MIC)为400mg/L,ε-PL对柑橘酸腐菌菌丝生长和孢子萌发抑制的半最大效应浓度(EC50)分别为128.79mg/L和214.77mg/L。800mg/L的ε-PL的对柑橘酸腐菌菌丝生长和孢子萌发抑制率为(99.88±0.20)%和(99.32±0.59)%浓度为1600、4800、6400mg/L的ε-PL处理可显著降低柑橘果实酸腐病的损伤接种发病率和病斑直径(P<0.05)。
4.分别经浓度为MIC和2MIC的ε-PL处理后的意大利青霉、柑橘酸腐菌胞外相对电导率,OD260值上升,表明经ε-PL处理后意大利青霉、柑橘酸腐菌的细胞膜通透性增加,核酸等胞内物质外渗流出,PI染色试验后,经MIC和2MIC的ε-PL处理后的意大利青霉、柑橘酸腐菌红色荧光信号明显高于对照组,表明ε-PL处理能够破坏意大利青霉、柑橘酸腐菌细胞膜的完整性。
5.扫描电镜观察结果发现,ε-PL处理可改变意大利青霉、柑橘酸腐菌的菌丝体形态。经ε-PL处理后意大利青霉菌丝体由粗壮、均匀,形状规则变成干瘪、褶皱不规则的状态。经ε-PL处理可使柑橘酸腐菌菌丝体由表面光滑、结构完整,隔膜明显状态转变为表面严重褶皱、膨大凸起,整体扭曲变形,菌丝断裂状态。
6.ε-PL具有抑菌作用,其可能是通过破坏意大利青霉、柑橘酸腐菌的细胞膜结构而导致菌体细胞内容物外渗,进而影响细胞的生长代谢,使菌丝体形态结构畸变与孢子萌发受阻,进而抑制了菌体细胞的生长繁殖。