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研究背景与目的:全蝎是我国传统中药,具有祛风、解毒、通络功效,主治惊风抽搐、癫痫等疾病,但由于其富含神经毒限制了临床应用。课题组已从东亚钳蝎蝎毒中分离纯化出具有抗癫痫活性的蝎毒耐热肽国家发明专利申请（申请号20130330290.1）。在此基础上,课题组对蝎毒耐热肽进行序列分析,命名为蝎毒耐热合成肽（Scorpion venom heat-resistant synthetic peptide,SVHRSP）。经固相化学合成得到的SVHRSP保持了蝎毒耐热肽的药效活性和安全性[1],且极大降低成本,具备称为候选新药的前景。目前,该候选物尚处于临床前研究阶段,且国内（外）均未见有关SVHRSP药代动力学研究的报道。本课题以SVHRSP为研究对象,建立SVHRSP含量测定的液质联用方法,以及血浆样品中SVHRSP含量的液质联用方法,并应用于大鼠静脉注射、灌胃给药后体内药代动力学研究中,了解SVHRSP在体内药动学行为,考察在各组织中的分布情况,研究了尿排泄情况,及其血脑屏障的通透性研究,又对SVHRSP初步进行了安全性评价及生物稳定性研究。实验方法:1.LC–MS/MS法:Agilent高效液相色谱仪,色谱柱:Hilic Silica色谱柱（4.6×150mm,5μm）,流动相（A）为乙腈,有机相（B）为纯水（含0.1%甲酸）,A:B=60:40;流速:0.6m L·min-1,柱温:30℃,进样量:20μL;采用等度洗脱。AB SCIEX QTRAP（?）5500 LC/MS质谱,离子源:电喷雾电离源（ESI）;扫描方式:正离子扫描,多反应监测（MRM）,喷雾电压:5500V（-）;鞘气流速:30 L·min-1辅助器流速:5L·min-1;毛细管电压:-37V（-）;毛细管温度:550℃,用于选择离子检测定量分析的离子为m/z 763→316、763→387。2.大鼠静脉注射给药SVHRSP(10mg·kg-1),收集0.017、0.08、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2h内血浆,样品处理后LC–MS/MS法进样分析。灌胃给药(10mg·kg-1),收集0.08、0.16、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2h内血浆,样品处理后LC–MS/MS法进样分析。考察其药代动力学特征。3.大鼠静脉注射给药SVHRSP(2mg·kg-1),在0,5,15,30min将大鼠断头处死,解剖,收集心、肝、脾、肺、肾、脑组织,组织样品处理方法后LC–MS/MS法进样分析,考察在各组织SVHRSP分布情况。大鼠静脉注射给药SVHRSP(10、100mg·kg-1)在0,5,15,120min取脑脊液,进样分析,考察SVHRSP能否透过血脑屏障。4.将C57小鼠按照体重分别腹腔注射100、300、1000、2000mg·kg-1的SVHRSP生理盐水溶液,每天定点称重给药观察,连续七天,记录小鼠给药后体重,饮食、外观、行为、分泌物、排泄物等变化。实验结果:1.建立同时测定SVHRSP血浆药物浓度的LC–MS/MS方法,SVHRSP线性范围1～10000ng·m L-1日内及日间精密度（RSD）均＜10.02%,准确度水平均大于97.59%;回收率约为95.43%,RSD低于4.56%;基质效应考察结果在94.63%左右,RSD低于8.62%,该方法快速、准确、可靠,符合生物样品检测要求,适用于SVHRSP的药物代谢动力学研究。2.静脉和灌胃给药后大鼠体内药代动力学研究,采用非房室模型计算,SVHRSP的药动学参数分别为t1/2（min）62.43±70.452,117.431±112.45;AUC0-t（μg/L*min）498110.101±145157.268,2662.61±1137.876;CLz（L/min/kg）0.022±0.009,2.439±0.845;MRT0-t（min）3.531±0.349,47.536±12.153;Vz（L/kg）1.812±1.694;343.864±243.149。结合不同房室模型下拟合参数和药时曲线,最小AIC以及F检验结果推测静脉给药在大鼠体内药代动力学行为符合三室模型,灌胃给药最佳房室模型为二室,权重系数均为1/cc。3.对各组织中浓度测定方法进行了考察,研究大鼠灌胃给药后,心、肝、脾、肺、肾、脑等组织的药物分布情况,于给药后5min、15min、30min三个时间点采集各组织样品,处理后测定分析。结果药物进入体内后迅速分布到各组织中,血流量较大的组织分布较多。SVHRSP在各组织中浓度由高到低分别为脑、肝、肺、心、脾、肾,药物在体内消除速度较快,各组织均无明显蓄积现象。SVHRSP在37℃的全血和血浆中不稳定,快速分解,而在37℃的生理盐水中保持稳定。SVHRSP能够通过血脑屏障进入脑脊液,静脉注射后,SVHRSP很快进入脑脊液,并随着时间的增加,脑脊液中的含量逐渐降低。4.C57小鼠腹腔注射100、300、1000、2000mg·kg-1的SVHRSP溶液。100mg·kg-1、300mg·kg-1组小鼠均没有死亡,小鼠食物摄取和体重都保持相对稳定;1000mg·kg-1、2000mg·kg-1组第二天开始出现死亡,小鼠不进食且体重急剧降低。结论:1.建立了一种高效、灵敏、可靠、特异性强的LC–MS/MS方法来定量测定SVHRSP。2.采用大鼠颈静脉给药,灌胃给药SVHRSP后,考察了不同给药方式下的SVHRSP的药动学行为。3.考察了大鼠静脉给药后,SVHRSP在各组织分布、尿排泄、体内代谢的情况;SVHRSP能够通过血脑屏障进入脑脊液。